субстрата, так и по типам основных питательных сред, объему культуральной среды и плотности ооцитов на единицу объема [2, 5, 7], а также использованию различных монослойных культур и клеток. Для культивирования ооцитов используют стандартные среды: ТС-199, Бринстера, Биггерса, ХЭМ-Ф-10, в которые добавляют сыворотки крови крупного рогатого скота или северных оленей, а также гормоны и другие, биологически активные вещества. Сыворотка крови, добавляемая в питательную среду в качестве биологически активной добавки для повышения выхода ооцитов со стадией развития метафаза-2 по некоторым данным, стабилизирует рН, оказывает антипротеолетическое действие и способствует более быстрой адаптации культивируемых объектов условиям культуральных сред. Кроме этого, сыворотка крови содержит компоненты, способствующие выживанию и развитию клеток, среди которых особое значение имеют полипептидные факторы роста (ППФР), а именно: инсулинеподобный фактор (ИФР), факторы роста эпидермиса (ФРЭ), тромбоцитов (ФРТ) и фибробластов (ФРФ). В настоящее время получены данные только о действии ППФР на процессы мейотического деления клеток.
На практике используется как сыворотка плодов теленка, так и сыворотка коров. Если фетальная сыворотка плодов коровы производится на коммерческой основе и ее качество контролируется производителем, то эстральная сыворотка получается в частном порядке от клинически здоровых доноров в тот же период полового цикла, что и возраст эмбриона или в период непосредственной охоты.
В своих исследованиях мы изучали эффективность использования сыворотки крови, полученной от коров, находящихся на разных стадиях полового цикла, добавляя ее в питательную среду по мере роста и развития эмбрионов, согласно их возраста, то есть в питательную среду с эстральной сывороткой (0 день) помещались зиготы. Эмбрионы, на вторые сутки после оплодотворения помещались в среду с сывороткой второго дня цикла и т.д.
По результатам исследований установлено достоверное превосходство второй и третьей групп клеток по выходу морул и бластоцист от числа оопитов поставленных на созревание по сравнению с контрольной - 41,6% и 48,4%, соответственно против 18,2% (Р<0,001). В том числе, по выходу бластоцист данный показатель превышал контроль на 7,0 и 9,8 % при Р<0,05 и Р<0,01, соответственно. Между второй и третьей группами достоверных различий не установлено.
Таким образом, использование в культуральных системах сыворотки крови от коров на разных стадиях полового цикла не снижает эффективности метода. Однако из-за достаточной сложности самой процедуры предпочтительней использовать сыворотку крови, полученную от коров в период охоты.
Как правило, кровь для получения сыворотки берется у животных во время спонтанного полового цикла, когда наличие и концентрация биологически активных веществ в ней отвечает физиологической норме животного на данный момент времени. Однако с разработкой методов гормональной регуляции полового цикла появилась возможность стимулировать активность фюиологических процессов в организме животного. Так, при гормональной обработке коров-доноров с целью вызывания множественной овуляции к росту стимулируется не один фолликул, как обычно, а несколько, что вызывает определенные сдвиги в гормональном фоне животного в сторону увеличения концентрации тех гормонов, которые непосредственно отвечают за фолликуло-и эмбриогенез - гормоны гипофиза, яичников, щитовидной железы и надпочечников. В связи с чем, встает закономерный вопрос об эффективности использования сыворотки крови от суперовулировавших коров-доноров в культуре in vitro при получении эмбрионов крупного рогатого скота.
В наших исследованиях донорами крови служили одни и те же животные, у которых была взята кровь на 0, 6 и 7 день спонтанного и стимулированного полового цикла. Нулевой день - это день охоты, шестой день - день, предшествующий
извлечению эмбрионов (стимулированный половой цикл) и седьмой день - это день извлечения эмбрионов.
Установлено что уровень дробления ранних зародышей в опытной группе (стимулированный половой цикл) хотя и не достоверно, но был выше по сравнению с контрольной группой (спонтанный половой цикл) на 11,7; 7,8 и 8,8% при использовании сыворотки крови, полученной на нулевой, шестой и седьмой дни полового цикла, то разница по выходу эмбрионов на стадии морула-бластоциста была уже в пользу контрольной группы при использовании сыворотки нулевого дня на 5,3%, шестого дня на 1,6% и седьмого дня на 6,3%. В том числе, по выходу бластоцист данный показатель составил 1,9; 2,9 и 3,5%, соответственно.
При этом следует отметить, что использование сыворотки нулевого дня как в контрольной, так и в опытной группе оказалось более эффективной по сравнению с сывороткой шестого и седьмого дня в контрольной группе на 10,1% и 8,2% и в опытной на 6,1 и 9,2%. В том числе, по выходу бластоцист превышение составляло 6,6 и 8,0%; 7,6 и 9,6%, соответственно. Снижение результативности получения эмбрионов на предимплантационнои стадии при использовании сыворотки крови коров, полученной в стимулированный половой цикл, скорее всего можно объяснить повышенной гормональной нагрузкой на организм животного и определенным изменением гормонального фона по сравнению со спонтанным половым циклом.
Помимо изучения эффективности использования сыворотки, полученной в стимулированный половой цикл, нами изучалась эффективность в системе in vitro сыворотки, полученной в период непосредственно гормональной обработки (табл. 97). Кровь у доноров брали в течение четырех дней обработки спустя 3 часа после утренней инъекции гонадотропина. Из полученных данных, что уровень дробления в контрольной группе достоверно превышал уровень дробления в остальных группах (Р<0,001). Аналогичные показатели получены и по выходу эмбрионов на
