бластоцист в этой группе превышал аналогичный показатель в первой группе на 4,4%, в третьей на 5,2% и в четвертой на 8,1%; в том числе по выходу бластоцист на 3,8%; 2,1%; 3,2%, соответственно. Что касается качества бластоцист, то наиболее низкий показатель оказался в группе ооцитов с концентрацией фолликулярной жидкости 20% и составил 66,7%, что на 33,3%; 26,6%; 22,2% ниже по сравнению с первой, третьей и четвертой группами, соответственно.
Таблица 95 - Влияние концентрации фолликулярной жидкости на уровень оплодотворения и выход жизнеспособных зародышей
| № п/п | Конц. фол. ж-ти, % | Кол-во ооцитов, n | Количество зародышей, n - % | ||
|---|---|---|---|---|---|
| дробящихся | Мо-Бл | в том числе | |||
| Бл | |||||
| 1. | 5 | 96 | 43–44,8*** | 20–20,8 | 7–7,3 |
| 2. | 10 | 135 | 88–65,2 | 34–25,2 | 15–11,1 |
| 3. | 15 | 100 | 55–55,0 | 20–20,0 | 9–9,0 |
| 4. | 20 | 114 | 57–50,0** | 19–16,7 | 9–7,9 |
In vivo фолликулярная жидкость является естественной средой созревания и развития ооцитов. В искусственных условиях для обеспечения необходимых условий созревания ооцитов и культивирования ранних зародышей чаще всего используется эстральная сыворотка крупного рогатого скота, включающая многочисленные компоненты, в том числе гормоны факторы роста и белки, способствующие эффективному созреванию ооцит-кумулюсных комплексов.
В таблице 96 представлена сравнительная эффективность использования в культуральных системах фолликулярной жидкости и эстральной сыворотки крупного рогатого скота.
Добавление данных компонентов в питательную среду проводилось в два этапа. В среде для созревания их концентрация составляла 5% от объема среды, через 96 часов после оплодотворения добавлялось еще 10%. Как показывает анализ полученных результатов достоверной разницы ни по
одному из показателей не установлено, за исключением выхода эмбрионов на предимплантационной стадии, в том числе бластоцист. В случае использования фолликулярной жидкости выход эмбрионов на 1,3%, а бластоцист на 2,2% был выше по сравнению с эстральной сывороткой. Что касается качества полученных зародышей - в первой группе данный показатель (Мо+Бл) превышал показатель второй группы на 5,8%, в то время как по качеству бластоцист получены обратные результаты. Качество эмбрионов, полученных в присутствии эстральной сыворотки, превышало аналогичный показатель первой группы на 22,2%.
Таблица 96 - Сравнительная эффективность использования в системе in vitro фолликулярной жидкости и эстральной сыворотки крупного рогатого скота
| № п/п | БАВ | Количество ооцитов, n | Количество зародышей, n - % | ||
|---|---|---|---|---|---|
| дробящихся | в том числе | ||||
| Мо+Бл | из них | ||||
| Бл | |||||
| 1. | Фолликулярная жидкость | 78 | 50 – 64,1 | 15–19,2 | 9–11,5 |
| 2. | Эстральная сыворотка | 118 | 77 – 65,2 | 21–17,8 | 11–9,3 |
Таким образом, приведенные данные свидетельствуют о том, что использование в культуральных системах in vitro фолликулярной жидкости наиболее эффективно, когда она получена из фолликулов диаметром 2-6 мм и добавлена в питательную среду в концентрации 10%. Такой вариант ее использования обеспечивает уровень оплодотворения 57,6 – 67,0%, а выход бластоцист 13,1 – 14,4% от числа поставленных на созревание ооцитов. При сравнительном анализе эффективности использования фолликулярной жидкости и эстральной сыворотки крупного рогатого скота достоверной разницы не установлено. Все показатели находились практически на одном уровне.
11.2.2. Эффективность использования эстральной сыворотки в культуре in vitro
Несмотря на достаточно высокий уровень разработки данной проблемы эффективность получения биологически полноценных эмбрионов в системе in vitro остается на сравнительно невысоком уровне. По некоторым данным [6, 8], в лучших лабораториях мира выход качественных зародышей (стадия бластоцисты) не превышает 35-40% от числа поставленных на созревание ооцитов, а в среднем этот показатель колеблется от 10 до 20% и зависит от ряда экзо- и эндогенных факторов, к которым, в первую очередь, относится создание оптимального газового и влажносгаого режимов культивирования, а также обеспечение растущих и развивающихся клеток необходимыми гормональными и энергетическими добавками.
В связи с выше сказанным, целью наших исследований явилось определение эффективности использования сыворотки крови крупного рогатого скота в системе in vitro.
Для полноценного созревания ооцитов в культуре in vitro им необходимо создать условия максимально соответствующие естественным, то есть тем, в которых обеспечивается нормальное функционирование механизмов регуляции оогенеза in vivo. При этом необходимо понимать, что созревание ооцитов - это комплексный процесс, включающий в себя мейотическое преобразование ядра, цитоплазматическое созревание и преобразование мембраны. Поэтому, если для завершения ядерного созревания in vitro ооцитам достаточно обеспечить в средах энергетический и гормональный минимум, то цитоплазматическое созревание обеспечивается целым рядом биологически активных веществ, обеспечивающих в дальнейшем успешное оплодотворение яйцеклетки и развитие ранних зародышей до предимплантационных стадий. Также необходимо отметить, что системы культивирования, используемые в разных лабораториях, могут сильно отличаться как по типам и дозам гормонального и энергетического
