аналогичный показатель яичников в лютеиновую на 8,7%, с желтым телом беременности - на 11,9%, с персистентным желтым телом - на 29,4%, с кистозным преобразованием - на 30,1%. При использовании яичников с гипофункцией полноценных эмбрионов не получено.
Установлено, что наиболее эффективным в наших исследованиях оказалось использование яичников в фолликулярной фазе. Однако следует отметить, что в работу необходимо включать весь полученный биоматериал, несмотря на его морфофункциональное состояние, особенно если донор I в себе высокоценную генетику.
С целью изучения оплодотворяемости ооцитов в зависимости от их содержания в одном яичнике было сформировано три группы: I - яичники, из которых выделено менее 10 ооцитов, II - от 10 до 20, III - более 20 клеток . Анализ данных свидетельствует, что наиболее эффективной по уровню дробления оказалась группа с количеством ооцитов от 10 до 20 на один яичник - на 5,7% по сравнению с третьей и на 11,4% по сравнению с первой группой (табл. 93).
Таблица 93 - Оплодотворяемость ооцитов в зависимости отих среднего количества в яичнике
| Группы ооцито | Кол-во ооцитов в яичнике | Количество прокультив ированных ооцитов, п | Количество оплодотворе нных ооцитов, п | Уровень дробления | Выход Мо- Бл | ||
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| n | % | n | % | ||||
| I | <10 | 154 | 154 | 73 | 47,4 | 42 | 27,3 |
| II | 10-20 | 250 | 250 | 147 | 58,8 | 53 | 21,2 |
| III | >20 | 290 | 290 | 154 | 53,1 | 64 | 22,1 |
По выходу жизнеспособных эмбрионов более высокие результаты получены при использовании яичников I группы. Выход зародышей на предимплантационных стадиях в этой группе превышал на 6,1 и 5,2% вторую и третью группы, соответственно.
11.2. Использование биологически активных веществ в культуральных системах in vitro
11.2.1. Эффективность использования фолликулярной жидкости в культуральных системах in vitro
Для получения фолликулярной жидкости ее аспирировали из фолликулов заданного диаметра. Для предотвращения коагуляции добавляли гепарин в концентрации (0,1 мг/мл). Затем центрифугировали при 3000 об/мин в течение 5 минут, фильтровали через миллипоровые фильтры с диаметром пор 0,22 µm и замораживали и по мере необходимости оттаивали.
В процессе экспериментов определялась эффективность использования фолликулярной жидкости из фолликулов диаметром 2-3 мм, 3-6 мм и > 6 мм фолликулярной жидкости из фолликулов коров, находящихся в лютеиновой и фолликулярной фазах полового цикла в концентрации 5, 10, 15 и 20% от объема питательной среды.
Результаты эффективности использования фолликулярной жидкости крупного рогатого скота из фолликулов разного диаметра представлены в таблице 94.
Таблица 94 - Эффективность использования фолликулярной жидкости крупного рогатого скота из фолликулов разного диаметраи разные фазы цикла
| Группа | Диаметр фолликулов, мм; фаза цикла | Кол-во ооцитов, n | Количество дробящихся, n-% | В том числе | |
|---|---|---|---|---|---|
| Мо+Бл, n-% | Из них | ||||
| Бл, n-% | |||||
| 1. | контроль | 110 | 57 - 54,8 | 38 - 34,5 | 13 – 11,8 |
| 2. | 2-3 мм | 97 | 65 – 67,0 | 39 – 40,2 | 14 – 14,4 |
| 3. | 3-6 мм | 130 | 75 - 57,6 | 54 - 41,5 | 17 – 13,1 |
| 4. | > 6 мм | 84 | 41 – 48,8* | 30 – 35,7 | 10 – 11,9 |
| 5. | Фолликулярн ая фаза | 68 | 37 – 54,4 | 20 – 29,4 | 7 – 10,3 |
| 6. | Лютеиновая фаза | 73 | 36 – 49,3 | 16 – 21,9 | 6 – 8,2 |
Анализ результатов, представленных в таблице 1, показывает, что уровень оплодотворения во второй группе на 9,4 – 18,2% превышал уровень оплодотворения в других группах. При этом разница между второй и четвертой группами оказалась достоверной (Р<0,05). По выходу эмбрионов на предимплантационных стадиях у второй и третьей групп показатели получены практически одинаковые 40,2 и 41,5%, соответственно, что на 5,7; 4,5 и 7; 5,8% выше по сравнению с контролем и четвертой группой, ооциты которой культивировались в присутствии фолликулярной жидкости из фолликулов диаметром более 6 миллиметров.
Что касается уровня выхода эмбрионов на стадии развития бластоциста, то здесь особых различий не наблюдалось, колебания составляли от 11,9% в присутствии фолликулярной жидкости из больших фолликулов до 14,4% из малых фолликулов (2-3 мм). В контроле данный показатель составил 11,8%. По качеству все бластоцисты были отличными. Уровень трансформации морул в бластоцисты в контроле составил 34,2%, в первой опытной – 35,9%, во второй – 31,5% и в третьей – 33,3%.
Таким образом, достоверных различий по выходу эмбрионов на стадии бластоциста в ходе опытов не установлено, что также относится и к эффективности использования фолликулярной жидкости от доноров, находящихся на разных стадиях полового цикла.
В таблице 95 представлены результаты исследований по определению влияния концентрации фолликулярной жидкости на эффективность получения эмбрионов в системе in vitro.
Как видно из приведенных данных наиболее эффективным оказалось использование фолликулярной жидкости в концентрации 10%. Так, выход дробящихся зародышей в этой группе составил 65,2%, что достоверно превышало данный показатель в группе ооцитов, культивировавшихся в присутствии 5% фолликулярной жидкости (Р<0,01) и в группе ооцитов, культивировавшихся в присутствии 20% фолликулярной жидкости (Р<0,05). Общий выход морул-
