возрасте 1,5-2 лет и телочек 1-2 месяцев практически одинаковы, то при дальнейшем культивировании зародышей выявлено, что максимальное число эмбрионов на стадиях морулы и бластоцисты получено из ооцитов молодняка второй и третьей групп. Это подтверждается и исследованиями Журавель Р.И. [27], которая утверждает, что все 100% ооцитов от 1-2-месячных и 48-месячных животных реинициировали мейоз при постановке их на культивирование. Значительно хуже созревали клетки от старых коров (6-8 лет). Наименьший процент ооцитов с дегенерированными клетками обнаружен при культивировании клеток от животных 1-2 месяцев.
В тоже время существует и другое мнение. Gandolfi F. et al [159] исследовали сравнительную способность к созреванию in vitro ооцитов, полученных от неполовозрелых телят (10-14 недель) и от зрелых коров. Отмечается, что ооциты телят характеризуются меньшим диаметром по сравнению с ооцитами коров, низкой скоростью метаболизма пирувата и глутамина и пониженной белоксинтезирующей активностью, что рассматривается как факторы, снижающие способность ооцитов к созреванию in vitro.
Функциональное состояние яичников также имеет немаловажное значение при получении эмбрионов вне организма. Как известно, яичники претерпевают морфологические и физиологические изменения в течение всего полового цикла. Наименьший процент клеток с дегенерированными хромосомами был обнаружен, когда культивировали ооциты с плотным кумулюсом из яичников в стадии фолликулярного роста и наибольший при культивировании яичников с признаками овуляции. При этом разница была достоверна (Р<0.05) [27187, 209]. Немаловажным фактором, влияющим на эффективность получения эмбрионов in vitro, является фаза полового цикла, в которую отбирали яичники. Boedino A. et al [130] были проведены опыты с целью изучения эффективности использования яичников коров в лютеальную фазу. В первом опыте отбирали яичники в лютеальной фазе с активным желтым
телом и яичники в фолликулярной фазе. Количество ооцитов, выделенных из яичников, и уровень дробления эмбрионов практически не отличались 12 и 10; 84 и 89% в лютеальную и фолликулярную фазы соответственно, но выход бластоцист был значительно выше (Р<0,05) в 1-й группе против 2-ой. Во втором опыте отбирали яичники с желтым телом и без него. Среднее количество ооцитов на яичник с желтым телом и без него не отличались (15 и 15). Уровень дробления эмбрионов был выше (Р<0,01) в группе без желтого тела, по сравнению с группой с желтым телом (88 и 75% соответственно). Однако выход бластоцист в группе яичников с желтым телом был выше (Р<0,01) по сравнению с группой без желтого тела – 24 против 13%. Таким образом, приведенные данные показывают, что высокие результаты можно получить не только при использовании яичников в фолликулярной, но и в лютеальной фазе.
Лобченко В.А. [52] считает, что наиболее подходящим источником ооцитов в количественном и качественном отношении могут быть яичники животных в диэструсе или проэструсе, а яичники в метэструсе практически не пригодны для получения полноценных ооцитов, способных к дальнейшему развитию.
Наличие и размер фолликулов также оказывает влияние на полноценное развитие клеток [186]. Так, наиболее высокие результаты получены при культивировании ооцитов, полученных из яичников, в которых имелся один фолликул диаметром более 10 мм или более 10 фолликулов диаметром от 2 до 5 мм по сравнению с яичниками, у которых фолликул диаметром более 10 мм отсутствовал вообще или фолликулов диаметром от 2 до 5 мм было менее 10. Аналогичные результаты получены и в исследованиях других авторов [120, 234, 181].
Hаwk H. et al [170] так же считают, что размер фолликулов влияет на созревание ооцитов. В процессе проведенных ими опытов фолликулы разделялись на три группы: плохие, средние, хорошие, а ооциты на хорошие и плохие. Исследовали фолликулы диаметром менее 3мм, от 3 до 8 мм. При анализе
уровня созревания, ооциты плохого качества показали самые низкие результаты, независимо от качества и диаметра фолликулов. Наиболее высокие результаты были получены при культивировании клеток из средних по качеству фолликулов диаметром 3-8 мм.
Stoсk A. и Smith K. [433] проведены аналогичные исследования, указывающие на влияние размера фолликула и кумулюса на созревание ооцитов. В эксперименте использовались ооциты из малых фолликулов диаметром менее 6 мм. Эти ооциты культивировались совместно с кумулюсом ооцитов из больших и малых фолликулов или с ооцитами без кумулюса из аналогичных по размеру фолликулов. По уровню дробления разницы между группами не установлено. Однако выход эмбрионов на стадии морула - бластоциста резко сокращался в среде с добавлением кумулюса ооцитов из больших фолликулов, что показывает на негативное влияние кумулюса ооцитов из больших фолликулов на развитие ооцитов из малых фолликулов.
Однако, некоторые из них считают, что созревание ооцитов не зависит от клеточного окружения, целостности ооплазмы и стадии хроматина. По мнению этих исследователей, существует тесная связь между типом кумулюса окружающего ооцит и созреванием ооцита [207].
Популяция ооцит – кумулюсных комплексов из антральных фолликулов гетерогенна в связи с тем, что в яичнике одновременно идут процессы роста и развития одних фолликулов и ооцитов и атрезия зрелых, что проявляется не только морфологически, но и в способности ооцитов созревать вне организма до стадии оплодотворения.
Критериев, которые позволили бы быстро отличить третический ооцит от растущего не разработаны, поэтому наиболее распространенным способом определения жизнеспособности ооцитов в настоящее время является их оценка по морфологическим показателям: состоянию кумулюса, его взаимосвязи с ооцитом, состоянию зоны и ооплазмы.
Первым признаком, говорящим о биологической
