центрорегулирование и сидиментация однако в большинстве случаев результаты опытов не подтвердили ожиданий в связи с чем данные методы не нашли широкого распространения.
Не дало положительных результатов использования электрофореза и метода фильтрации спермиев.
В 50-е годы нашего столетия, после того как был обнаружен НУ-антиген начали разрабатываться иммунологические методы, которые показали более высокие результаты. Так, в исследованиях Booman et. al. /132/ при оценке 112 эмбрионов получена точность от 73 до 77%.
Однако отмечается, что сама процедура может оказать воздействие на последующую жизнеспособность эмбрионов.
В итоге что разработанные методы по разделению спермиев не нашли широкого применения в производстве /133/.
В связи с разработкой и внедрением в практику метода трансплантации эмбрионов появилась возможность определения пола ранних зародышей и первая такая попытка была предпринята Gardner R. et. al. /161/, которые устанавливали пол зародышей кроликов по наличию или отсутствию полового хроматика.
После того как было установлено, что удаление части клеток трофобласта не оказывает отрицательного воздействия на жизнеспособность эмбрионов их пол начали определять с помощью хромосомного анализа отторгнутых клеток трофобласта /123/.
Точность метода составила в среднем 68…70%. Недостаток данного метода заключается в том, что для анализа пригодны только эмбрионы поздних (12…15 суток) стадии развития, что снижало эффективность их пересадки и криоконсервации.
В 1978 были проведены первые работы по определению пола у 6…7 дневных эмбрионов /132/.
Было отмечено, что хотя отделение трофобласта не имеет негативного влияния на жизнеспособность эмбриона но недостаток митотических клеток лимитирует надежность метода которая не превышает в среднем 50%.
Современные методы определения пола зародышей основаны на анализе ДНК.
Использование полимеразой цепной реакции значительно расширило возможности метода, точность которого в лучших лабораториях достигает 90-95%, а приживляемость достигает 55,6% по свежим эмбрионам и 44,4% по заморожено-оттаянным /227/.
Таким образом, последние разработки научных лабораторий вплотную подошли к тому, чтобы данные методы нашли широкое применение в практике разведения и селекции крупного рогатого скота.
В последнее время экономические условия в странах с развитым животноводством все чаще заставляют фермеров решать вопрос определения пола эмбрионов на ранних стадиях их развития. Современные достижения биотехнологии позволяют делать это с достаточно высоким уровнем достоверности (93…95%).
В наших исследованиях мы пытались изучить влияние биопсии клеток при определении пола на дальнейшую жизнеспособность эмбрионов. В таблице 62 представлены результаты определения пола у ранних зародышей в зависимости от стадии их развития и качества эмбрионов.
Таблица 62 - Результаты определения пола ранних зародышей
| Параметры | Количество эмбрионов (%) | Пол | |
|---|---|---|---|
| бычок % | телочка % | ||
| Протестировано эмбрионов, всего | 1675 | ||
| Не определен пол | 151 (9,0) | - | - |
| Определен пол | 1524 (90,9) | 51,6 | 48,4 |
| Стадия развития: | - | - | - |
| Морула | 1138 (74,7) | 51,8 | 48,2 |
| Бластоциста | 386 (25,3) | 51,3 | 48,7 |
| Качество эмбрионов | - | - | - |
| отличное и хорошее | 1241 (81,4) | 50,7 | 49,3 |
| удовлетворительное | 283 (18,6) | 55,8 | 44,2 |
Как видно из результатов исследований, соотношение полов примерно одинаковое. Хотя несколько больше все-таки рождается бычков. Стадия развития никакого влияния на него не оказывает, то же можно сказать и о качестве эмбрионов. Хотя следует отметить тот факт, что при пересадке эмбрионов удовлетворительного качества количество бычков выше на 11,6% против 44,2%.
В таблице 63 представлены данные влияния биопсии зародышей на их дальнейшую приживляемость. При пересадке свежих эмбрионов стельность составила 55,6% при биопсии и 53,0% у интактных эмбрионов. Что касается замороженооттаянных, эти показатели составили 44,4% и 49,5% соответственно.
Таблица 63 - Влияние биопсии эмбрионов при определении пола на уровень стельности
| Характеристика эмбрионов | Количество пересадок n | Уровень стельности, % |
|---|---|---|
| Свежие: | - | - |
| с биопсией | 410 | 55,6 |
| без биопсии | 953 | 53,0 |
| Заморожено-оттаянные: | - | - |
| с биопсией | 90 | 44,4 |
| без биопсии | 200 | 49,5 |
Как видим, биопсия не имеет достоверного влияния на дальнейшую жизнеспособность эмбрионов, а при пересадке свежих даже несколько увеличивает их приживляемость (55,6% против 53,0%). Если рассмотреть этот вопрос в разрезе качества зародышей, то и здесь данная тенденция сохраняется (табл. 64).
