селекции, является микрохирургическое разделение ранних зародышей на две или более частей /89/. Все клетки зародышевого комплекса эмбриона тотипотентные и содержат полную генетическую информацию о всем организме, вследствие чего при разобщении связей между первичными бластомерами или группами бластомеров сохраняется способность развития целого организма из разобщенных частиц. Это подтверждается обширными практическими исследованиями во всем мире.
Одна из попыток разделения зародышей на отдельные бластомеры завершилась получением пяти пар монозиготных двоен у овец /272/.
Долгое время попытки разделения эмбрионов крупного рогатого скота на стадиях развития на отдельные бластомеры, с последующим доведением их развития до стадии бластоцисты, были безуспешны. Например, у эмбрионов мышей, у которых удаляли прозрачную оболочку или она оказывалась поврежденной развитие протекало не далее стадии поздней морулы /113/. В последующем Willadsen, S.M. /272/ удалось получить идентичных близнецов крупного рогатого скота. Техника деления заключалась в извлечении зародышей из яйцеводов донора хирургическим способом на стадии 2 бластомеров (2…3-ий день), путем отделения их от прозрачной оболочки и разделением на бластомеры и размещении каждого из них в свободную оболочку. Сконструированные полуэмбрионы размещали в микроцилиндре, состоящего из физраствора и агар-агара (1%). В свою очередь, цилиндр с эмбрионами помещали в более широкий цилиндр, состоящий из одного агар-агара и хирургическим методом переносили в перевязанный яйцевод овцематки (промежуточный реципиент) на 24…48 часов после чего эмбрионы извлекали и пересаживали телкам-реципиентам. Было пересажено 52 эмбриона 13 реципиентам, по 2 в каждый рог матки. Стельными стали 9 реципиентов. После отела было получено одна тройня, две двойни и один одинцовый теленок.
Впоследствии стали применять способ деления 7-дневных
эмбрионов, на стадии поздней морулы или ранней бластоцисты на две половинки. Одновременно совершенствовались и микрохирургические манипуляции.
Несколько упрощенный способ использовали французские ученые D.Osil et. al. /230/. Семидневные эмбрионы разделяли на специальном микроманипуляторе, включающем несколько видов ииструментов для различны микрохирургических операций. Делени производили с помощью микроскальпеля через прозрачную оболочку на две половинки . Затем каждую половинку переносили в пустую оболочку неоплодотворенной яйцеклетки или дегенерированного эмбриона. После кратковременного культивирования в течение 2…4 часов пересаживали реципиенту нехирургическим способом. При таком способе разделения приживляeмocть полуэмбрионов составляла около 50%.
Несколько выше результаты были получены в опытах Y. Hahn /168/. Ими было отмечено, что деление эмбрионов не оказывает отрицательного влияния на при-живляемость эмбрионов. Так, при пересадке половинок эмбрионов стельность составила 58%, а при пересадке целых эмбрионов – 63%.
Auran T. /121/ считаtт, что решающим условием для получения монозиготных двоен является предварительный тщательный отбор эмбрионов. Только эмбрионы на стадии морулы высокого качества можно использовать для деления. Это означает, что из 10 вымытых эмбрионов только один может быть пригоден для разделения и последующего получения монозиготных двоен.
В литературе имеется сообщение о попытке в ФРГ в 1983 г. использовать этот способ в коммерческих целях одной из станций по пересадке эмбрионов крупного рогатого скота. После раздeлeния 23 эмбрионов на стадии морулы было получено 46 полуэмбрионов, которые были тут же пересажены реципиентам. У 32 реципиентов была установлена стельность (71,1%), из них у 22 реципиентов прижились обе половинки, т.е. 11 эмбрионов (48,9%).
По оценке специалистов этой станции, включение метода
получения монозиготных близнецов в программе трансплантации эмбрионов даст возможность значительно увеличить выход телят от высокоценных коров.
В наших исследованиях мы использовали эмбрионы только "отличного" и "хорошего" качества. Оценку качества эмбрионов производили по их морфологической характеристике и в соответствии со шкалой оценки морул и бластоцист/32/.
Деление эмбрионов производили двумя методами. Первый метод – деление осуществляли металлическим микроскальпелем под лупой, без подсадки в зоны пеллюцида (в условиях производства). Второй метод – эмбрионы делили с использованием микроманипулятора в лабораторных условиях. Полуэмбрионы после деления помещали в зоны пеллюцида. После деления эмбрионов все половинки оценивались в зависимости от их размера и морфологической характеристики. Было разделено 22 эмбриона и получено 40 нормальных половинок (90,9%).
Округлившиеся, компактные, симметричные половинки эмбрионов оценивались как "отличные". Полуэмбрионы выглядевшие неравномерными, неправильной формы относились к "хорошим". Условно годными половинками считались полуэмбрионы совершенно не округлившиеся и размер которых был меньше половины целого эмбриона.
После деления эмбрионов "отличного" и "хорошего" качества было получено 29,5% "отличных" половинок, 38,6% – "хороших", 22,7% – "условно годных" и 9,1% не пригодных к пересадке. Первым методом было разделено 10 эмбрионов и получено 18 (90%) половин, вторым – 12 эмбрионов и получено 22 половинки (91,7%). Телкам первой группы (n = 8) пересаживали полуэмбрионы разделенные первым методом, а второй группе (n = 10) полуэмбрионы разделенные вторым методом. В обеих группах получено по 4 стельности (табл. 80). Стельность реципиентов после пересадки половинок эмбрионов в первой группе была выше на 10%, чем во второй. В результате эксперимента получено три стельности двойнями – одна в первой и две во второй группе. Из 11 телят шесть были из числа
