культуре in vitro от созревания до оплодотворения является морфофункциональное состояние яичников. До настоящего времени идет спор о том, на какой стадии полового цикла лучше всего получать ооциты. Проведенные и проводимые исследования по этому вопросу однозначного ответа не дали. Получаемые данные нестабильны и носят противоречивый характер.

Исследования по оценке эффективности получения эмбрионов в культуре in vitro в зависимости от функционального состояния яичников показали, что по уровню дробления значительно более высокие результаты попри использовании ооцитов из яичников первых 3-х групп (на фолликулярной и лютеиновой фазе полового цикла, а также с желтым телом беременности). Использование яичников с персистентным желтым те-с кистой и с гипофункцией резко снижало уровень дробления. Так, средний уровень дробления при использовании яичников первых трех составлял 58,1%, то последних 3-х всего лишь 33%, то есть на 25,1% (табл. 92).

Таблица 92 - Влияние физиологического состояния яичников на эффективность получения эмбрионов вне организма

Аналогичная картина наблюдалась и по выходу жизнеспособных эмбрионов. Выход морул и бластоцист у яичников на фолликулярной стадии составил 33% и превысил

аналогичный показатель яичников в лютеиновую на 8,7%, с желтым телом беременности - на 11,9%, с персистентным желтым телом - на 29,4%, с кистозным преобразованием - на 30,1%. При использовании яичников с гипофункцией полноценных эмбрионов не получено.

Установлено, что наиболее эффективным в наших исследованиях оказалось использование яичников в фолликулярной фазе. Однако следует отметить, что в работу необходимо включать весь полученный биоматериал, несмотря на его морфофункциональное состояние, особенно если донор I в себе высокоценную генетику.

С целью изучения оплодотворяемости ооцитов в зависимости от их содержания в одном яичнике было сформировано три группы: I - яичники, из которых выделено менее 10 ооцитов, II - от 10 до 20, III - более 20 клеток . Анализ данных свидетельствует, что наиболее эффективной по уровню дробления оказалась группа с количеством ооцитов от 10 до 20 на один яичник - на 5,7% по сравнению с третьей и на 11,4% по сравнению с первой группой (табл. 93).

Таблица 93 - Оплодотворяемость ооцитов в зависимости отих среднего количества в яичнике

По выходу жизнеспособных эмбрионов более высокие результаты получены при использовании яичников I группы. Выход зародышей на предимплантационных стадиях в этой группе превышал на 6,1 и 5,2% вторую и третью группы, соответственно.

11.2. Использование биологически активных веществ в культуральных системах in vitro

11.2.1. Эффективность использования фолликулярной жидкости в культуральных системах in vitro

Для получения фолликулярной жидкости ее аспирировали из фолликулов заданного диаметра. Для предотвращения коагуляции добавляли гепарин в концентрации (0,1 мг/мл). Затем центрифугировали при 3000 об/мин в течение 5 минут, фильтровали через миллипоровые фильтры с диаметром пор 0,22 µm и замораживали и по мере необходимости оттаивали.

В процессе экспериментов определялась эффективность использования фолликулярной жидкости из фолликулов диаметром 2-3 мм, 3-6 мм и > 6 мм фолликулярной жидкости из фолликулов коров, находящихся в лютеиновой и фолликулярной фазах полового цикла в концентрации 5, 10, 15 и 20% от объема питательной среды.

Результаты эффективности использования фолликулярной жидкости крупного рогатого скота из фолликулов разного диаметра представлены в таблице 94.

Таблица 94 - Эффективность использования фолликулярной жидкости крупного рогатого скота из фолликулов разного диаметраи разные фазы цикла