одному из показателей не установлено, за исключением выхода эмбрионов на предимплантационной стадии, в том числе бластоцист. В случае использования фолликулярной жидкости выход эмбрионов на 1,3%, а бластоцист на 2,2% был выше по сравнению с эстральной сывороткой. Что касается качества полученных зародышей - в первой группе данный показатель (Мо+Бл) превышал показатель второй группы на 5,8%, в то время как по качеству бластоцист получены обратные результаты. Качество эмбрионов, полученных в присутствии эстральной сыворотки, превышало аналогичный показатель первой группы на 22,2%.

Таблица 96 - Сравнительная эффективность использования в системе in vitro фолликулярной жидкости и эстральной сыворотки крупного рогатого скота

Таким образом, приведенные данные свидетельствуют о том, что использование в культуральных системах in vitro фолликулярной жидкости наиболее эффективно, когда она получена из фолликулов диаметром 2-6 мм и добавлена в питательную среду в концентрации 10%. Такой вариант ее использования обеспечивает уровень оплодотворения 57,6 – 67,0%, а выход бластоцист 13,1 – 14,4% от числа поставленных на созревание ооцитов. При сравнительном анализе эффективности использования фолликулярной жидкости и эстральной сыворотки крупного рогатого скота достоверной разницы не установлено. Все показатели находились практически на одном уровне.

11.2.2. Эффективность использования эстральной сыворотки в культуре in vitro

Несмотря на достаточно высокий уровень разработки данной проблемы эффективность получения биологически полноценных эмбрионов в системе in vitro остается на сравнительно невысоком уровне. По некоторым данным [6, 8], в лучших лабораториях мира выход качественных зародышей (стадия бластоцисты) не превышает 35-40% от числа поставленных на созревание ооцитов, а в среднем этот показатель колеблется от 10 до 20% и зависит от ряда экзо- и эндогенных факторов, к которым, в первую очередь, относится создание оптимального газового и влажносгаого режимов культивирования, а также обеспечение растущих и развивающихся клеток необходимыми гормональными и энергетическими добавками.

В связи с выше сказанным, целью наших исследований явилось определение эффективности использования сыворотки крови крупного рогатого скота в системе in vitro.

Для полноценного созревания ооцитов в культуре in vitro им необходимо создать условия максимально соответствующие естественным, то есть тем, в которых обеспечивается нормальное функционирование механизмов регуляции оогенеза in vivo. При этом необходимо понимать, что созревание ооцитов - это комплексный процесс, включающий в себя мейотическое преобразование ядра, цитоплазматическое созревание и преобразование мембраны. Поэтому, если для завершения ядерного созревания in vitro ооцитам достаточно обеспечить в средах энергетический и гормональный минимум, то цитоплазматическое созревание обеспечивается целым рядом биологически активных веществ, обеспечивающих в дальнейшем успешное оплодотворение яйцеклетки и развитие ранних зародышей до предимплантационных стадий. Также необходимо отметить, что системы культивирования, используемые в разных лабораториях, могут сильно отличаться как по типам и дозам гормонального и энергетического

субстрата, так и по типам основных питательных сред, объему культуральной среды и плотности ооцитов на единицу объема [2, 5, 7], а также использованию различных монослойных культур и клеток. Для культивирования ооцитов используют стандартные среды: ТС-199, Бринстера, Биггерса, ХЭМ-Ф-10, в которые добавляют сыворотки крови крупного рогатого скота или северных оленей, а также гормоны и другие, биологически активные вещества. Сыворотка крови, добавляемая в питательную среду в качестве биологически активной добавки для повышения выхода ооцитов со стадией развития метафаза-2 по некоторым данным, стабилизирует рН, оказывает антипротеолетическое действие и способствует более быстрой адаптации культивируемых объектов условиям культуральных сред. Кроме этого, сыворотка крови содержит компоненты, способствующие выживанию и развитию клеток, среди которых особое значение имеют полипептидные факторы роста (ППФР), а именно: инсулинеподобный фактор (ИФР), факторы роста эпидермиса (ФРЭ), тромбоцитов (ФРТ) и фибробластов (ФРФ). В настоящее время получены данные только о действии ППФР на процессы мейотического деления клеток.

На практике используется как сыворотка плодов теленка, так и сыворотка коров. Если фетальная сыворотка плодов коровы производится на коммерческой основе и ее качество контролируется производителем, то эстральная сыворотка получается в частном порядке от клинически здоровых доноров в тот же период полового цикла, что и возраст эмбриона или в период непосредственной охоты.

В своих исследованиях мы изучали эффективность использования сыворотки крови, полученной от коров, находящихся на разных стадиях полового цикла, добавляя ее в питательную среду по мере роста и развития эмбрионов, согласно их возраста, то есть в питательную среду с эстральной сывороткой (0 день) помещались зиготы. Эмбрионы, на вторые сутки после оплодотворения помещались в среду с сывороткой второго дня цикла и т.д.