вать здоровых коров в возрасте от 4 до 5 лет с хорошо развитой молочной железой, пригодной к машинному доению.
После отбора потенциальных коров-доноров проводят гормональное вызывания полиовуляции и осеменяют спермой проверенного производителя-улучшателя, получают несколько эмбрионов.
Для вызывания суперовуляции в середине полового цикла корове вводят препараты гонадотропных гормонов, вызывающих усиленный рост и развитие многих пузырчатых фолликулов и их овуляцию на фоне обратного развития жёлтого тела. У коров и тёлок для вызывания множественной овуляции применяют гонадотропины гипофизарного и плацентарного происхождения. Наиболее эффективны гонадотропины сыворотки жерёбых кобыл (ГСЖК). Гонадотропины СЖК лучше всего применять в середине полового цикла: с 8-го по 15…16-й день. Препараты вводят однократно в дозе 2…3 тыс. ИЕ. Через 48 часов после введения ГСЖК инъецируют простагландин Ф2 (ПГФ2) или один из его синтетических аналогов. Обычно через 2 дня наступает стадия возбуждения полового цикла с проявлением течки, общего возбуждения, охоты и овуляции. В этот период осеменяют животных-доноров.
Коровы-доноры должны всегда получать полноценный рацион. Имеются неоспоримые доказательства, что голодание коров-доноров в период после введения ГСЖК заметно уменьшает количество овуляций.
Для осеменения доноров берут сперму выдающихся быков-производителей, проверенных по качеству потомства и признанных улучшателями продуктивности. После гормональной обработки доноров у них выявляют половую охоту не менее 2 раз в день. Примерно у 10…12 % самок признаки стадии возбуждения полового цикла не проявляются. Осеменение животных, у которых обнаружена охота, проводят несколько раз с 12-часовыми интервалами до её окончания, иногда его повторяют 3…4 раза. В каждой дозе спермы должно быть не менее 50 млн. подвижных спермиев.
Оплодотворение яйцеклеток происходит в яйцепроводе. Образовавшиеся зиготы у крупного рогатого скота попадают в матку на 4-й день. Эмбрионы целесообразно извлекать у коров на 7…8-й день после пер-
168
вого осеменения (до освобождения зародыша из прозрачной оболочки). Для извлечения эмбрионов животных фиксируют в станке, ректально определяют сколько жёлтых тел находится в каждом яичнике. Для вымывания зародышей из матки катетер вводят в рог матки как можно глубже. После того как катетер достигнет в роге матки необходимого положения в баллончик катетера накачивают 10…15 мл воздуха. При этом катетер фиксируется в роге матки и промывная жидкость не вытекает мимо катетера. Закрепив катетер, промывают полость рога матки (рисунок 76).
В рог матки в зависимости от его величины вводят порциями 40…60 мл промывной жидкости, затрачивая на промывание каждого рога не более 500 мл. Перед извлечением катетера удаляют воздух из баллончика. Таким же образом промывают и второй рог.
1 – катетер для извлечения зародышей; 2 – шейка и 3 – рог матки; 4 – надувной баллончик; 5 – яичники
Р исунок 76 – Извлечение эмбрионов.
В качестве среды для промывания используют фосфатно-буферный солевой раствор (ФБС) Дюльбекко.
Собранную в цилиндр промывную жидкость отстаивают 20…35 мин. при температуре 20…37 °С, чтобы эмбрионы опустились на дно, после чего верхний слой удаляют с помощью сифона. Нижний слой жидкости порционно по 20…30 мл для обнаружения эмбрионов исследуют в чашках Петри под бинокулярной лупой при 10…50-кратном увеличении.
При оценке биологической полноценности эмбрионов наиболее широкое распространение получил способ оценки качества эмбрионов по морфологическим признакам. При этом учитывают формулу зиготы, состояние зоны пеллюцида, число бластомеров, равномерность дробления и выраженность эмбриобласта и трофобласта (рисунок 77). Зародыши с признаками дегенерации, уродств и недоразвития для пересадок непригодны. Результаты пересадок эмбрионов коровам-реципиентам показали, что в среднем 7 из 10 считаются пригодными для трансплантации.
Пригодные для трансплантации эмбрионы с помощью пастеровской пипетки переносят в среду для кратковременного хранения (среда Дюльбекко с добавлением 20 % фетальной сыворотки телёнка).
Для замораживания эмбрионов готовят специальную среду. Охлаждение проводят в несколько этапов: 1) снижают температуру от 20 °С до минус 5…7 °С со скоростью 1…10 °С в минуту; 2) при минус 6…7 °С проводят искусственную кристаллизацию, касаясь пинцетом, переохлажденным в жидком азоте, поверхности контейнера с зародышами; 3) продолжают охлаждать со скоростью 0,3 °С в минуту до минус 36 °С; 4) погружают в жидкий азот для быстрого охлаждения до минус 196 °С. Хранят замороженные эмбрионы в сосудах Дьюара. Для оттаивания ёмкости с эмбрионами быстро переносят в водяную баню с температурой 25…37 °С и держат до исчезновения льда.
Зародыши крупного рогатого скота лучше других переносят замораживание и размораживание, выживаемость до 50…70 %.
Реципиентов отбирают в количестве 6…8 голов на каждого донора из числа животных, не имеющих большой племенной ценности. При этом используют тёлок в возрасте 16…18 мес. массой 350…380 кг или коров не старше 7 лет. Животные должны быть здоровыми, без признаков нарушения обмена веществ. Успех пересадок в значительной степени зависит от физиологически полноценного течения половых циклов и правильного определения охоты у реципиентов. Половые циклы должны протекать регулярно, быть полноценными, с синхронным форми-
170
