вого осеменения (до освобождения зародыша из прозрачной оболочки). Для извлечения эмбрионов животных фиксируют в станке, ректально определяют сколько жёлтых тел находится в каждом яичнике. Для вымывания зародышей из матки катетер вводят в рог матки как можно глубже. После того как катетер достигнет в роге матки необходимого положения в баллончик катетера накачивают 10…15 мл воздуха. При этом катетер фиксируется в роге матки и промывная жидкость не вытекает мимо катетера. Закрепив катетер, промывают полость рога матки (рисунок 76).
В рог матки в зависимости от его величины вводят порциями 40…60 мл промывной жидкости, затрачивая на промывание каждого рога не более 500 мл. Перед извлечением катетера удаляют воздух из баллончика. Таким же образом промывают и второй рог.
1 – катетер для извлечения зародышей; 2 – шейка и 3 – рог матки; 4 – надувной баллончик; 5 – яичники
Р исунок 76 – Извлечение эмбрионов.
В качестве среды для промывания используют фосфатно-буферный солевой раствор (ФБС) Дюльбекко.
Собранную в цилиндр промывную жидкость отстаивают 20…35 мин. при температуре 20…37 °С, чтобы эмбрионы опустились на дно, после чего верхний слой удаляют с помощью сифона. Нижний слой жидкости порционно по 20…30 мл для обнаружения эмбрионов исследуют в чашках Петри под бинокулярной лупой при 10…50-кратном увеличении.
При оценке биологической полноценности эмбрионов наиболее широкое распространение получил способ оценки качества эмбрионов по морфологическим признакам. При этом учитывают формулу зиготы, состояние зоны пеллюцида, число бластомеров, равномерность дробления и выраженность эмбриобласта и трофобласта (рисунок 77). Зародыши с признаками дегенерации, уродств и недоразвития для пересадок непригодны. Результаты пересадок эмбрионов коровам-реципиентам показали, что в среднем 7 из 10 считаются пригодными для трансплантации.
Пригодные для трансплантации эмбрионы с помощью пастеровской пипетки переносят в среду для кратковременного хранения (среда Дюльбекко с добавлением 20 % фетальной сыворотки телёнка).
Для замораживания эмбрионов готовят специальную среду. Охлаждение проводят в несколько этапов: 1) снижают температуру от 20 °С до минус 5…7 °С со скоростью 1…10 °С в минуту; 2) при минус 6…7 °С проводят искусственную кристаллизацию, касаясь пинцетом, переохлажденным в жидком азоте, поверхности контейнера с зародышами; 3) продолжают охлаждать со скоростью 0,3 °С в минуту до минус 36 °С; 4) погружают в жидкий азот для быстрого охлаждения до минус 196 °С. Хранят замороженные эмбрионы в сосудах Дьюара. Для оттаивания ёмкости с эмбрионами быстро переносят в водяную баню с температурой 25…37 °С и держат до исчезновения льда.
Зародыши крупного рогатого скота лучше других переносят замораживание и размораживание, выживаемость до 50…70 %.
Реципиентов отбирают в количестве 6…8 голов на каждого донора из числа животных, не имеющих большой племенной ценности. При этом используют тёлок в возрасте 16…18 мес. массой 350…380 кг или коров не старше 7 лет. Животные должны быть здоровыми, без признаков нарушения обмена веществ. Успех пересадок в значительной степени зависит от физиологически полноценного течения половых циклов и правильного определения охоты у реципиентов. Половые циклы должны протекать регулярно, быть полноценными, с синхронным форми-
170
рованием стадии возбуждения. Реципиенты должны быть в состоянии средней упитанности, с хорошим физическим развитием, иметь крупный, правильной формы таз. Яичники и матка должны быть нормально развиты, без патологических изменений.
После пересадки реципиенту должны быть обеспечены оптимальные условия для дальнейшего развития эмбриона и рождения жизнеспособного плода.
При пересадке эмбрионов состояние всего организма и половой системы реципиента, в том числе состояние яичников, фаза дифференцировки эндометрия, должны соответствовать стадии развития эмбрионов. Только в этом случае последние попадают в условия, благоприятные для их приживления и развития. Если разница в сроках проявления полового цикла между донором и реципиентом составляет более 24 часов, то частота беременностей после пересадок резко снижается. Пересадку зародышей в производственных условиях лучше проводить при точной синхронности полового цикла у доноров и реципиентов. Результаты 2556 пересадок зародышей показали, что при точной синхронизации доноров и реципиентов беременность после пересадки развивалась у 67 % животных. Если охота у реципиента была на 12 часов раньше или позже, чем у донора, беременность устанавливали у 60…61 % реципиентов.
Пересадку зародышей реципиентам удавалось осуществить только до 16-го дня после выявления охоты. В более поздние сроки беременность не развивается, так как начинается обратное развитие жёлтого тела и в проводящих половых путях протекают процессы разрушения и обновления слизистых оболочек и подготовки их к очередной стадии возбуждения полового цикла. При небольшом количестве животных-реципиентов возникает необходимость в синхронизации полового цикла у реципиентов и доноров путём использования простагландинов и гестагенов. Через 2…3 дня после применения этих препаратов коровы и тёлки приходят в охоту. Несвоевременное выявление животных в охоте снижает процент развития беременности после пересадки эмбрионов.
