При использовании замороженных эмбрионов нет необходимости в синхронизации полового цикла реципиентов и доноров. В этом случае эмбрионы можно пересаживать в сроки, когда у реципиентов естественно наступят соответствующие дни полового цикла.
Для пересадки эмбрионы подготавливают в стерильной тонкой трубочке диаметром 1 мм и объёмом 0,25 мл. Присоединив шприц к трубочке со стороны фильтра, набирают столбик среды для культивирования (высотой 1 см), затем такой же столбик воздуха и среду с зародышем (контролируя под бинокулярной лупой). После этого вновь набирают столбик воздуха и среду для культивирования. Набранная в трубочку среда достигает фильтра с поливиниловым спиртом; фильтр набухает и больше не пропускает воздух, поэтому из пластиковой соломинки ничего не вытекает. Подготовленную трубочку с эмбрионом вставляют в стерильный прибор для пересадки. Прибор вводят во влагалище, через канал шейки матки и далее в рог матки ближе к его верхушке (примерно на глубину 10 см) (рисунок 78).
Затем содержимое из трубочки выталкивают движением внутреннего поршня и прибор быстро, но осторожно извлекают из матки.
1 – прибор для осеменения, 2 – шейка и 3 – рог матки, 4 – яичник, 5 – рука, введённая в прямую кишку
Рисунок 78 – Введение эмбрионов в рог матки.
После подсадки животным создают условия кормления и содержания в соответствии с технологическими требованиями, не допускают травмирования и сильных отрицательных стрессовых воздействий. Через 2 месяца после пересадки проводят диагностику беременности ректальным способом.
Пересадка эмбрионов является одним из способов получения большого количества телят высокопродуктивных животных, но гарантии, что полученное потомство будет повторять или превосходить по продуктивности своих родителей, нет.
172
Искусственное получение однояйцевых близнецов
Решение проблемы копирования генотипов высокопродуктивных животных обусловлен прежде всего разработкой новых способов получения генетически идентичных животных. Крупный рогатый скот характеризуется малой частотой двойнёвости, ещё реже встречаются однояйцевые двойни. Низкие показатели частоты двойнёвости и её наследуемости не позволяют рассчитывать на высокую эффективность селекции.
Разделение ранних эмбрионов на два или более бластомеров, способных развиваться в процессе всего онтогенеза, с последующей пересадкой их реципиентам повышает выход телят минимум в 2 раза.
Всех близнецов можно разделить на два типа: двуяйцевые (дизиготные) и однояйцевые (монозиготные). Двуяйцевые близнецы возникают в результате оплодотворения двух яйцеклеток разными спермиями. Однояйцевые – путём разделения зиготы таким образом, что обе половины отделяются друг от друга и развиваются в отдельные эмбрионы. Разделение эмбриона на две части происходит на 2- или 8-клеточных стадиях эмбрионального развития. Другим механизмом возникновения монозиготных двоен является расщепление эмбриобласта внутри бластоцисты.
С генетической точки зрения возникновение монозиготных близнецов связано с копированием генотипов. Принципиальный механизм спонтанного возникновения монозиготных двоен может быть использован для искусственного получения однояйцевых двоен, представляющих собой генетические копии.
Первые монозиготные близнецы крупного рогатого скота были получены в 1981 году С. Вилладсеном с сотрудниками.
Для получения монозиготных двоен 8…10-суточные эмбрионы, находящиеся на стадии бластоцисты, разделяют тонким металлическим ножом точно посредине трофобласта и эмбриобласта (рисунок 79).
На деление одной бластоцисты затрачивается всего 1 минута. После 2…4-часового культивирования при 37 °С половинки эмбрионов по-
мещают в пайетты и трансцервикально (на 8-е сутки) трансплантируют гормонально подготовленным реципиентам. Исследователи подчеркивают, что в практических условиях наиболее пригодными для трансплантации являются половинки эмбрионов 8-суточного возраста.
Основным методом хранения половинок эмбрионов является криоконсервация. Для глубокого замораживания половинок эмбрионов считает целесообразным использовать 8-суточные эмбрионы, находящиеся на стадии бластоцисты, но более эффективным считается деление эмбрионов после процесса замораживания.
Рисунок 79 – Схема деления эмбрионов крупного рогатого скота, по Б. П. Завертяеву.
Окончательная разработка данного биотехнического метода позволит использовать моно-
зиготных двоен как в исследовательских целях, так и в практических программах по воспроизводству и селекции крупного рогатого скота.
Регулирование пола
Получение животных определенного пола имеет важное практическое значение, особенно для молочного скотоводства, где главный хозяйственно полезный признак (молочная продуктивность) относится к признакам, ограниченным полом, поэтому возникает важная задача – регулирование соотношения полов.
Коровы имеют половые хромосомы XX , быки XY , остальные хромосомы (аутосомы) у животных разных полов одинаковы. В популяциях животных поддерживается соотношение полов 50 % : 50 %.
Парный набор гомологичных половых хромосом XX в кариотипе млекопитающих определяет развитие самки, а гетерогенных XY -хромосом – самца. Спермии с Y -хромосомой имеют меньшую массу и величину. У млекопитающих размеры Х -хромосомы обычно выше по сравнению
