был при хранении эмбрионов до замораживания не более 2-х часов. Хранение эмбрионов с 2 до 4 часов снижало их приживляемость до 21,9%. Следовательно, для успешной пересадки замороженно-оттаянных эмбрионов очень важно замораживать их сразу после извлечения и оценки качества.
Для создания и поддержки определенного режима криоконсервации зародышей в настоящее время разработан и внедрен в практику ряд электронных устройств, обеспечивающих заданный режим охлаждения. Среди таких устройств наибольшее распространение получили такие, как ″ Планер ″ (Англия), ″ Криоцель ″ (Германия), Миникул-АС-25 (Франция), а также Российского и Украинского УОП-1, УОП-2, ЗЭМ-4и МБИ-К.
Испытания показали достаточную надежность и эффективность данных приборов. Их использование позволяет получать в среднем до 80% жизнеспособных эмбрионов /93, 103/. Сравнительные испытания замораживателей R-204 (Англия), Миникул АС-25 (Франция) и УОП-1 (Украина) не выявило достоверных различий между ними. Так, сохранность эмбрионов находилась на уровне 80…90%, а приживляемость составляла около 46%. Выживаемость эмбрионов при использовании замораживателя ″ Криоцель ″ (Германия) находилась в пределах 88…95,5%, а их приживляемость составила 37,5%.
8.1. Влияние различных способов криоконсервирования и деконсервации эмбрионов на их сохранность
Согласно таблице 44 эмбрионы отличного качества при их заморозке с использованием этиленгликоля и оттаивании в растворе сахарозы. сохранили свою жизнеспособность в 100% случаев.
Таблица 45 - Сохранность эмбрионов в зависимости от криопротектора, способа оттаивания и качества эмбрионов
| Качество эмбрионов | Криопротектор | |||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| этиленгликоль | глицерин | |||||||
| Способ оттаивания | ||||||||
| стандартный | с сахарозой | стандартный | с сахарозой | |||||
| оттаяно, n | приг-х, n-% | оттаяно, n | приг-х, n-% | оттаяно, n | приг-х, n-% | оттаяно, n | приг-х, n- % | |
| Отличные | 357 | 327-91,6 | 97 | 97-100 | 341 | 312-91,5 | 102 | 92-90,2 |
| Хорошие | 108 | 97-89,8 | 53 | 51-96.2 | 150 | 135-90,0 | 41 | 37-90,2 |
| Удовл. | 36 | 16-44,4 | 33 | 23-69,7 | 29 | 11-37,9 | 20 | 15-75,0 |
Практически такие же результаты были получены в случае с эмбрионами хорошего качества (96,2%), что касается эмбрионов удовлетворительного качества, то наименьший уровень сохранности отмечен при использовании в процессе заморозки глицерина и этиленгликоля – при стандартном методе оттаивания – 37,9 и 44,4% соответственно. В целом же, как при криоконсервации зародышей в этиленгликоле так и при их криоконсервации в глицерине отмечена тенденция снижения сохранности при оттаивании клеток с использованием стандартного метода по сравнению с использованием сахарозы по всем уровням качества эмбрионов.
В таблице 46 приведены результаты исследования по изучению влияния на сохранность эмбрионов криопротектора при замораживании, способа оттаивания и стадии развития эмбрионов.
Анализ полученных данных показывает, что независимо от используемого при замораживании криопротектора и способа оттаивания наибольная выживаемость отмечена у ранних бластоцист по сравнению с морулами и поздними бластоцистами.
Следует отметить и тот факт, что сохранность эмбрионов при использовании стандартного метода оттаивания несколько снижалась по сравнению со способом оттаивания с применением сахарозы 88,4-89,0% против 92,1-92,5% при применении этиленгликоля и глицерина, соответственно, что еще раз подтверждает положительное влияние данного криопротектора на жизнеспособность эмбрионов при их замораживании и оттаивании.
Таблица 46 - Сохранность эмбрионов в зависимости от способа замораживания, оттаивания и стадии развития
| Стадия | Криопротектор | ||||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| этиленгликоль | этиленгликоль | ||||||||
| Способ оттаивания | |||||||||
| стандартный | стандартный | стандартный | стандартный | ||||||
| оттаяно, n | приг-х, n-% | оттаяно, n | приг-х, n-% | оттаяно, n | приг-х, n-% | оттаяно, n | приг-х, n-% | ||
| Мо | 362 | 320-88,4 | 90 | 83-92,2 | 279 | 236-84,6 | 77 | 68-88,3 | |
| Бл I | 104 | 93-89,4 | 60 | 57-95,0 | 185 | 173-93,5 | 59 | 53-89,8 | |
| Бл II | 35 | 97-77,1 | 33 | 31-93,9 | 56 | 49-87,5 | 27 | 23-85,2 | |
В таблице 47 представлены результаты сохранности эмбрионов в зависимости от их качества, стадии развития и криопротектора. Наивысшую сохранность (96,8%) показали ранние бластоцисты отличного качества, замороженные в этиленгликоле. Несколько ниже (95,3%) при заморозке в глицерине. А самую низкую – поздние бластоцисты удовлетворительного качества, замороженные в глицерине (50,0%). Достаточно высокую сохранность показали также морулы и бластоцисты хорошего качества: от 94,0% (ранние бластоцисты) до 92,8% – морулы.
