эмбрионов, на стадии поздней морулы или ранней бластоцисты на две половинки. Одновременно совершенствовались и микрохирургические манипуляции.
Несколько упрощенный способ использовали французские ученые D.Osil et. al. /230/. Семидневные эмбрионы разделяли на специальном микроманипуляторе, включающем несколько видов ииструментов для различны микрохирургических операций. Делени производили с помощью микроскальпеля через прозрачную оболочку на две половинки . Затем каждую половинку переносили в пустую оболочку неоплодотворенной яйцеклетки или дегенерированного эмбриона. После кратковременного культивирования в течение 2…4 часов пересаживали реципиенту нехирургическим способом. При таком способе разделения приживляeмocть полуэмбрионов составляла около 50%.
Несколько выше результаты были получены в опытах Y. Hahn /168/. Ими было отмечено, что деление эмбрионов не оказывает отрицательного влияния на при-живляемость эмбрионов. Так, при пересадке половинок эмбрионов стельность составила 58%, а при пересадке целых эмбрионов – 63%.
Auran T. /121/ считаtт, что решающим условием для получения монозиготных двоен является предварительный тщательный отбор эмбрионов. Только эмбрионы на стадии морулы высокого качества можно использовать для деления. Это означает, что из 10 вымытых эмбрионов только один может быть пригоден для разделения и последующего получения монозиготных двоен.
В литературе имеется сообщение о попытке в ФРГ в 1983 г. использовать этот способ в коммерческих целях одной из станций по пересадке эмбрионов крупного рогатого скота. После раздeлeния 23 эмбрионов на стадии морулы было получено 46 полуэмбрионов, которые были тут же пересажены реципиентам. У 32 реципиентов была установлена стельность (71,1%), из них у 22 реципиентов прижились обе половинки, т.е. 11 эмбрионов (48,9%).
По оценке специалистов этой станции, включение метода
получения монозиготных близнецов в программе трансплантации эмбрионов даст возможность значительно увеличить выход телят от высокоценных коров.
В наших исследованиях мы использовали эмбрионы только "отличного" и "хорошего" качества. Оценку качества эмбрионов производили по их морфологической характеристике и в соответствии со шкалой оценки морул и бластоцист/32/.
Деление эмбрионов производили двумя методами. Первый метод – деление осуществляли металлическим микроскальпелем под лупой, без подсадки в зоны пеллюцида (в условиях производства). Второй метод – эмбрионы делили с использованием микроманипулятора в лабораторных условиях. Полуэмбрионы после деления помещали в зоны пеллюцида. После деления эмбрионов все половинки оценивались в зависимости от их размера и морфологической характеристики. Было разделено 22 эмбриона и получено 40 нормальных половинок (90,9%).
Округлившиеся, компактные, симметричные половинки эмбрионов оценивались как "отличные". Полуэмбрионы выглядевшие неравномерными, неправильной формы относились к "хорошим". Условно годными половинками считались полуэмбрионы совершенно не округлившиеся и размер которых был меньше половины целого эмбриона.
После деления эмбрионов "отличного" и "хорошего" качества было получено 29,5% "отличных" половинок, 38,6% – "хороших", 22,7% – "условно годных" и 9,1% не пригодных к пересадке. Первым методом было разделено 10 эмбрионов и получено 18 (90%) половин, вторым – 12 эмбрионов и получено 22 половинки (91,7%). Телкам первой группы (n = 8) пересаживали полуэмбрионы разделенные первым методом, а второй группе (n = 10) полуэмбрионы разделенные вторым методом. В обеих группах получено по 4 стельности (табл. 80). Стельность реципиентов после пересадки половинок эмбрионов в первой группе была выше на 10%, чем во второй. В результате эксперимента получено три стельности двойнями – одна в первой и две во второй группе. Из 11 телят шесть были из числа
отелов двойнями. Выход телят в первой группе, также был несколько выше и составил 62,5%.
Таблица 80 - Результаты пересадки разделенных эмбрионов
| Показатель | Методы деления | ||
|---|---|---|---|
| первый | второй | всего | |
| Разделено эмбрионов | 10 | 12 | 22 |
| Получено половинок (n-%) | 18-90,0 | 22-91,7 | 40-90,9 |
| Пересажено половин | 16 | 20 | 36 |
| Число реципиентов | 8 | 10 | 18 |
| Стельных реципиентов | 4 | 4 | 8 |
| Процент стельности | 50,0 | 40,0 | 44,4 |
| Получено телят | 5 | 6 | 11 |
| в том числе: | |||
| двоен | 2 | 4 | 6 |
| одинцов | 3 | 2 | 5 |
| Приживляемость половинок | 31,2 | 30,0 | 30,6 |
Рациональное использование эмбрионов является одной из основных задач специалиста. Поэтому целью нашей работы было изучить, снижается ли уровень использования эмбриоматериала при пересадке разделенных эмбрионов (табл. 81).
Из таблицы 81 видно, что при использовании одинакового числа целых эмбрионов получено в первой группе телок 8 стельностей, во второй – 10 стельностей. Уровень стельности был выше в первой группе (48,9%), чем во второй (45,5%). Показатель выхода телят от числа целых эмбрионов составил в первой группе 50%, во второй 45,5%, а от числа стельных реципиентов превышение в первой группе составило 37,5%.
