Таблица 81 - Уровень использования эмбриоматериала при пересадке половинок и целых эмбрионов
| Показатель | Полуэмбрионы | Целые эмбрионы |
|---|---|---|
| Использование эмбрионов | 22 | 22 |
| Пересажено половинок и целых эмбрионов | 36 | 22 |
| Число реципиентов | 18 | 22 |
| Стельных реципиентов | 8 | 10 |
| Процент стельности реципиентов | 44,4 | 45,5 |
| Получено телят | 11 | 10 |
| Процент выхода телят от числа целых эмбрионов | 50,0 | 45,5 |
| Процент выхода телят от числа стельных реципиентов | 137,5 | 100,0 |
При трансплантации реципиентам по одному демиэмбриону уровень приживляемости составил 47,4% или 90,0% по отношению к числу интактных эмбрионов (из 10 разделенных эмбрионов получено 19 пригодных дэмиэмбрионов, из числа которых 9 прижились). При пересадке одному реципиенту двух полуэмбрионов уровень стельности был сопоставим с пересадкой интактных эмбрионов: 54,5 и 61,9% соответственно (табл. 82).
Таблица 82 - Эффективность дисекции ранних зародышей коров
| Показатели | Интактные эмбрионы | Демиэмбрионы | |
|---|---|---|---|
| по 1 на реципиента | по 2 на реципиента | ||
| Количество реципиентов | 210 | 19 | 22 |
| Стельных реципиентов | 130 | 9 | 12 |
| Уровень стельности, % | 61,9 | 47,4 | 54,5 |
В таблице 83 представлены данные по влиянию возраста эмбрионов на эффективность десекци эмбрионов.
Таблица 83 - Влияние возраста эмбрионов при их дисекции на приживляемость
| Стадия развития эмбрионов | Количество пересадок | Стельных реципиентов, гол. | Стельность, % |
|---|---|---|---|
| Мо II | 36 | 14 | 38,9 |
| Бла I | 72 | 30 | 41,7 |
| Бла II | 60 | 27 | 45,0 |
По результатов исследования установлено, что наиболее высокую приживляемость после деления показали поздние бластоцисты уровень приживляемости половинок которых составил 45,0%.
Анализ полученных данных позволяет заключить, что в результате деления эмбрионов без микроманипулятора в производственных условиях можно получить дополнительно до 40% телят. Приживляемость половинок при этом методе достигала 31,2%.
ГЛАВА 11. БИОТЕХНОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД ПОЛУЧЕНИЯ ЭМБРИОНОВ IN VITRO
Исследования в области экспериментальной эмбриологии привели к выдающимся результатам, особенно в области медицины, где в 1981 году получили потомство после оплодотворения женской яйцеклетки в культуре in vitro.
В настоящее время все шире развертываются исследования и на сельскохозяйственных животных. Хорошо известно, что репродуктивный материал самок крупного рогатого скота определяется десятком тысяч потенциальных яйцеклеток, подавляющая часть из которых атрезирует и в воспроизводстве не участвует.
Развитие трансплантации как биотехнологического метода позволило более эффективно использовать репродуктивный потенциал высокопродуктивных животных, резко увеличить коэффициент размножения высококлассных особей. Однако
разработанные методы стимуляции не позволяют в полной мере использовать потенциальный воспроизводительный фонд, заложенный в яичниках.
При этом индуцирование высокой степени множественной овуляции отрицательно сказывается на выходе полноценных эмбрионов. Высокая вариабельность и непредсказуемость реакции яичников на гонадотропин делает известные методы ненадежными. Одна из основных ролей в решении данного вопроса отводится биотехнологии in vitro, которая в большей мере могла бы удовлетворить потребности как в производстве эмбрионов на определенных стадиях развития, так и в развитии приоритетных направлений в биотехнологии.
Получение полноценных эмбрионов крупного рогатого скота в условиях in vitro зависит от множества факторов, которые обуславливают нормальное ядерное и цитоплазматическое созревание ооцитов, их оплодотворение и развитие эмбрионов до предтрансплантационных стадий. Строгое соблюдение технологических параметров, стандартизация условий культивирования стабилизируют результативность опытов.
Начальным этапом всех работ по технологии in vitro является получение в достаточном количестве исходного материала и его кратковременное или длительное хранение. Как отмечает Гузеватый О.Е. и др. [20] нерегулярность поступления яичников с мясокомбината является сдерживающим фактором по проведению экспериментов по оплодотворению ооцитов коров вне организма. Разработка методов краткосрочного хранения ооцитов позволила бы планомерно проводить опыты, добиваясь наиболее оптимальных сроков культивирования и оплодотворения.
Кратковременное хранение ооцитов можно проводить как в яичниках, так и в синтетических питательных средах. Однако хранение в яичниках до 12-15 часов не отличается высокой эффективностью. До метафазы 2 созревают только около 5-10% клеток из-за закисления фолликулярной жидкости [19]. Поэтому большинство исследователей склоняется к тому, чтобы снизить
