клеточной стадии и благоприятствуют развитию зародышей до стадии морулы-бластоцисты [155, 204]. Еще одной группой биологически активных веществ, влияющих на эффективность получения эмбрионов in vitro, являются ростовые факторы, к которым относятся инсулиноподобный фактор роста, фибринальный фактор роста, эпидермальный фактор роста и ряд других. По данным Lee E. et al. [196] добавление ростовых факторов не влияло на выход дробящихся зародышей до 2-8 клеточной стадии, однако увеличивало, и значительно (Р<0,05) выход морул-бластоцист. Наиболее эффективным фибринальный фактор роста оказался в концентрации 0,05мг/мл. О позитивном влиянии вышеперечисленных факторов на развитие и биологическую полноценность эмбрионов говорится и в работе Gandolfi F. еt. al. [160].

Много внимания уделяется и вопросу плотности ооцитов на объем среды. Так, выход бластоцист на 10 день был ниже в малых группах ооцитов (1-6 в капле) нежели в больших. Однако не было различий, от величины групп на выход эмбрионов, когда ооциты культивировались на монослое клеток печени буйвола. Тем не менее, когда эмбрионы культивировались по отдельности, количество клеток (клеточная масса) у них было меньше, чем при культивировании в группах.

Бластоцисты появлялись значительно раньше в случае когда они инкубировались с клетками печени буйвола, при этом и количество клеток в эмбрионе у них была выше [151].

Аналогичного мнения придерживается и O′Doherty E. [228], который также утверждает, что ооциты, созревающие в группах, показали значительно лучший результат по сравнению с «одиночками», По уровню клеток, достигших метафазы II, эта разница составила 18,8%, а по выходу бластоцист – 7%. Кроме того, было установлено, что концентрация сперматозоидов ниже 2000 снижает уровень дробления и выход бластоцист. Оптимальное соотношение 2000 сперматозоидов в 20 мл среды для оплодотворения.

Таким образом, несмотря на достигнутые успехи в области экстракорпорального оплодотворения ооцитов крупного

рогатого скота и получения на этой основе эмбрионов, пригодных для пересадки, вопросы получения, оценки, созревания и оплодотворения ооцитов, подготовки спермы к оплодотворению вне организма, культивирование ранних зародышей до настоящего времени остаются открытыми.

В настоящее время получение эмбрионов вне организма животных прочно занимает одно из ведущих мест в комплексе биотехнических направлений ускоренного размножения сельскохозяйственных животных. Разработка новой биотехнологии, в которой сочетаются трансплантация эмбрионов, культивирование и оплодотворение ооцитов т укго, а также трансплантация эмбрионов полученных таким образом не только существенно повысит потенциал гамет в расчете на одну племенную корову, но и позволит достоверно оценить генотип и, следовательно, резко увеличить генетический прогресс в популяции. Получение на этой основе большого числа эмбрионов крайне важно для создания банка эмбрионов, а в последствии и многочисленных семейств выдающихся по продуктивности животных.

В настоящее время разработаны методы, позволяющие выделять из яичников коров до 200 ооцитов, культивировать их и оплодотворять in vitro. Однако выход биологически полноценных эмбрионов остается низким, поэтому продолжаются интенсивные исследования с использованием современных биологических методов.

Оплодотворение ооцитов in vitro достигнуто у 20 видов млекопитающих. В 1968 г. появилось первое сообщение о нормальном потомстве, полученном от мышей, в 1974 г. - от крыс, в 1981 г. - от человека и крупного рогатого скота, в 1983 г. - от свиней и в 1984 г. - от овец..

В Республике Беларусь первый теленок из эмбриона, полученного в культуре in vitro был получен в 1995 сотрудниками лаборатории генетики и разведения крупного рогатого скота БелНИИЖ на базе на базе Брестского ГПП

Благодаря достигнутому за последние 20 лет прогрессу в понимании сложных процессов, связанных с культивированием

in vitro экстракорпоральным оплодотворением ооцитов и эмбриональным развитием млекопитающих, появилась возможность существенно усовершенствовать метод оплодотворения вне организма.

11.1. Факторы, влияющие на эффективность технологии in vitro

11.1.1. Взаимосвязь морфофункционального состояния яичников и способа выделения ооцитов с эффективностью получения эмбрионов in vitro

Данные по морфологическим показателям яичников, использованных в процессе получения эмбрионов в культуре in vitro (табл. 84) показали, что длина яичников находилась в прямой зависимости от их объема и колебалась от 26,5±1,44 мм (объемом до 4,0 см ) до 39,4±1,6 мм (объемом более 8,0 см ). Аналогичная картина наблюдалась и при анализе данных о ширине яичников, которая колебалась от 15,4±0,97 (объемом до 4,0 до 25,5±1,23 (объемом более 8,0 см).

Таблица 84 - Морфологические показатели яичников, использованных для получения эмбрионов in vitro

Таким образом, средние параметры, использованных нами