увеличение концентрации сыворотки является наиболее эффективным, мы попытались установить в одном из своих опытов, результаты которого представлены в таблице 98.

Таблица 98 - Эффективность получения ранних зародышей в культуре in vitro в зависимости от времени добавления эстральной сыворотки

Как и в предыдущих наших исследованиях колебания уровня дробления во всех случаях не отличалось какой-либо закономерностью и составляло от 46,0 до 63,1%, чего нельзя сказать о выходе морул и бластоцист, наиболее высокий уровень которых наблюдался при добавлении сыворотки через 96 часов после оплодотворения и составлял 75,4% (при концентрации сыворотки 20%) и 82,8% (при концентрации сыворотки 15%) от числа дробящихся зародышей. В среднем - 79,2%, что на 11,2% и 29,7% превышал средний показатель выход зародышей на данной стадии развития при добавлении сыворотки через 72 и 120 часов, соответственно. При этом во втором случае разница высоко достоверна(Р<0,001). Таким образом использование в в культурных системах сыворотки крови коров, находящихся на разных стадиях полового цикла, позволяет увеличить выход бластоцист на 9,8% по сравнению с контролем. Наиболее оптимальным периодом времени увеличения концентрации

сыворотки в процессе культивирования ранних зародышей является интервал в 96 часов. Выход морул-бластоцист от числа дробящихся клеток увеличивался на 11,2 и 29,7% по сравнению с интервалом времени в 72 и 120 часов при достоверной разнице Р<0,001. Использова ние сыворотки крови коров в стимулированный половой цикл снижало выход бластоцист на 1,9 - 3,5%; в период гормональной обработки на 11,9 - 21,7% при достоверной разнице - Р<0,001.

11.2.3. Оценка эффективности получения эмбрионов в системе in vitro в условиях разной концентрации СО2 в атмосфере

Состав газавой фазы, используемой при культивировании клеток ооцитов in vitro, определяется тремя факторама: типом среды, использованием открытых или закрытых емкостей, а так же необходимой буферной емкостью. Некоторые параметры культивирования могур варьироваться, но должно соблюдаться одно непременное условие – концентрация бикабоната и углекислого газа должны находиться в равновесии. Этот бкфер был выбран главным образом потому, что он соответствует физиологической буферной системе крови, а парционное давление СО2 в легких составляет 40 мм рт.ст., что соответсвует 5%.

Целью исследований являлось изучение влияния различных концентраций углекислого газа в атмосфере на процессы созревания и оплодотворения яйцеклеток крупного рогатого скота.

Известно, что концентрации углекислого газа в воздухе, окружающем созревающие ооциты и развивающиеся ранние зародыши, оказывает непосредственное влияние на кислотность среды, в которой находятся половые клетки, а значит жизненно важна для создания оптимальных условий культивирования.

Данные о влиянии концентрации углекислого газа в инкубаторе на эффективность созревания и оплодотворения яйцеклеток крупного рогатого скота, а также развитие ранних

зародышей до предимплантационной стадии (табл. 101) показали, что количество клеток, вступивших в дробление, во II и III группах находилось практически на одном уровне: 62,3% при 7%-ной концентрации СО2 и 67,0% при 5,0%-ной концентрации СО2. Несколько ниже (54,7%) был получен результат при наличии в воздухе 3%-ной концентрацией СО2. Общее количество эмбрионов, достигших стадии развития морула - бластоциста (от количества дробящихся), колебалось от 22,2% при наличии в воздухе 7%-ной концентрации СО2 до 35,3% при 3%-ной, что свидетельствует о менее благоприятном влиянии повышенных концентраций углекислого газа на благополучное развитие зародышей до более поздних стадий и тем самым способствует их дальнейшему культивированию. Так, из 82 дробящихся зародышей при условии 3%-ной концентрации СО2 до стадии бластоциста развилось только 12 (14,6%), при 7%-ной концентрации СО2 данный показатель находился на уровне 3,7%, в то время как при 5%-ной концентрации газа уровень трансплантации дробящихся клеток в бластоцисты составил 22,4% , из которых 86,7% зародыши отличного качества.

Таблица 99 - Влияние концентрации СО2 в воздухе на эффективность получения эмбрионов в культуре in vitro

По мере своего развития клетки монослоя так же, как и сами эмбрионы, выделяют в окружающую среду в качестве продукта своей жизнедеятельности углекислый газ и тем самым повышают его концентрацию в воздухе. Влияние снижения