концентрации СО2 в атмосфере по мере роста и развития эмбрионов и клеток кумулюса на уровень эффективности культивирования представлено в таблице 99.

Таблица 100 - Влияние снижения концентрации СО2 в воздухе по мере роста и развития за р одышей

Так, при культивировании ооцитов опытной группы концентрация СО2 снижалась с момента оплодотворения до окончания опыта с 5,0 до 3,8%, в то время как в контрольной группе содержание углекислого газа в воздухе оставалось постоянным - 5,0%.

Как показывает анализ данных, представленных уровень дробящихся зародышей был несколько выше в контрольной группе на 5,7%. Выход бластоцист в опытной группе превышал контрольную на 6,9%, что свидетельствует о положительном эффекте снижения концентрации СО2 в воздухе по мере роста и развития ранних зародышей.

Питательная среда представляет собой раствор определенного состава, к которому добавляются компоненты различного биологического происхождения (добавки плазмы, сыворотки крови, тканевые экстракты и т.д.). Минеральные компоненты в этих растворах подбираются так, чтобы они выполняли буферную функцию, поддерживая постоянный кислотно-щелочной баланс среды в процессе культивирования. Постоянство рН является одним из основных условий культивирования. В связи с чем вопрос взаимодействия углекислого газа с различными по составу средами вызывает

определенный интерес. В нашем случае это среда ТС-199 и среда Менезо (табл. 101).

Таблиц 101 - Влияние концентрации СО2 на эффективность получения эмбрионов в культуре in vitro в зависимости от используемых сред

Анализ данных показывает, что уровень дробления зародышей колебался от 32 до 58,9% при использовании ТС-199 и от 37,5 до 58,5% в присутствии среды Менезо при концентрации СО2 от 3,0 до 5,0%. При этом наиболее высокие результаты, как и в предыдущих опытах, получены при 5,0%ной концентрации СО2 (58,9 и 58,5% соответственно). Что касается выхода бластоцист, то среда Менезо показала более высокую эффективность по сравнению с ТС-199 по мере снижения концентрации СО2 в воздухе. Так, если при 5,0%-ной концентрации СO2 выход бластоцист практически не различался (41,7 и 41,2%), то при концентрации углекислого газа 4% эта разница увеличилась до 20,8%. К сожалению небольшая выборка эмбрионов не позволяет судить о достоверности полученных результатов, однако тенденция увеличения выхода бластоцист очевидна, причем если при 3%-ной концентрации СО2 с использованием ТС-199 не получено ни одной бластоцисты, то в случае со средой Менезо получена одна бластоциста из 5 морул (20%). Таким образом, оптимальной

концентрацией СО2 в атмосфере культуральной системы является 5%, позволяющей получать до 22,4% бластоцист от числа дробящихся зародышей.Снижение концентрации углекислого газа по мере роста и развития клеток повышает выход бластоцист (эмбрионов) по сравнению с контролем на 6,9%.Использование среды Менезо показало более высокую эффективность по сравнению с ТС-199 по мере снижения концентрации СО2 в окружающем воздухе. При 4%-ной концентрации СО2 выход бластоцист увеличился на 20,8%, при 3%-ной концентрации в случае использования среды ТС-199 развитие морул до следующей стадии не произошло.

11.2.4. Влияние плотности ооцитов на единицу объема и площади при получении эмбрионов in vitro

Среди хорошо известных факторов, влияющих на созревание, оплодотворение и развитие ранних зародышей in vitro в первую очередь, после средовых, называется плотность или количество ооцитов на единицу объема. Установлено многими исследованиями, значительно более высокие результаты получаются в том случае, когда ооцит-кумулюсные комплексы (ОКК) культивируются в группах и объясняется это тем, что в процессе группового созревания в экстрацеллюлярной среде аккумулируются ростообразующие факторы, выделяемые ОКК и способствующие созреванию и развитию клеток.Так, Ward F. et. al. сообщает, что в том случае, когда ооциты созревали и оплодотворялись по одному, выход бластоцист значительно снижался по сравнению с культивированием ооцитов в группах по 5, 10, 15 или 25 шт. Аналогичные данные получены и по результатам исследований Nago Y., в которых был установлен не только более высокий выход бластоцист в том случае, когда ооциты культивировались в группах, но и отмечена более высокая внутриклеточная масса эмбрионов и их жизнеспособность. Polasz А. отмечает, что если по уровню созревания и оплодотворения между различными группами ооцитов существенной разницы не отмечено, то выход