Как видно из таблицы наиболее эффективной оказалась средаТироде с выходом эмбрионов на предимплантационных стадиях 19,2-25,8% При уровне дробления 54,5-61,6%, соответвтвенно.
Таблица 106 - Оплодотворяемость ооцитов в различных средах
| Оплодотвор | Дробящихся | Выход Мо- | |||
|---|---|---|---|---|---|
| Состав среды | ено | зародышей | В1 | ||
| ооцитов, п | n | % | n | % | |
| ТC-199 | 143 | 23 | 16,1 | 3 | 2,1 |
| Тироде | 156 | 85 | 54,5 | 30 | 19,2 |
| Тироде М | 190 | 117 | 61,6 | 49 | 25,8* |
| Игла | 170 | 24 | 14,1 | 4 | 2,4 |
В таблице 107 представлены результаты совместной инкубации спермы с ооцитами. Как видно из таблицы оплодотворяемость яйцеклеток находится в прямой зависимости от продолжительности совместного культивирования гамет. Так, при трехчасовом культивировании спермиев с ооцитами получено 14,9% дробящихся зародышей, из них 19,2% морулбластоцист, что составило 2,8% от общего количества использованных в опыте ооцитов. Увеличение времени совместного инкубирования клеток до 6-ти и 9-ти часов повысило оплодотворяемость ооцитов на 2,2 и 12,9%; уровень морул-бластоцист, по отношению к количеству оплодотворенных остался на прежнем уровне - 18,7; 22,0%, и составил 3,2 и 6,1% от ооцитов данных опытных групп. Дальнейшее возрастание продолжительности пребывания спермиев и яйцеклеток в одной чашке до 12-ти и 15-позволило получить 32,5 и 40% (Р<0,01) дробящихся зародышей, к 32,2 и 29,7% эмбрионов на предимплантационных стадиях, что соответствует 10,5 и 11,8% от общего количества поставленных на культивирование клеток. При 18-ти часовом инкубировании оплодотворилось (Р<0,001) яйцеклеток, из них получено 32,1% Мо-В1, что составило от всех клеток в группе. Наиболее оптимальным является время 18,1-20,0 часов, где получено
57,4% (Р<0,001) дробящихся зародышей, из 8% Мо-В1, что составило 21% от всех ооцитов в группе. Увеличение времени совместного культивирования до 24 часов снизило на 2,6% количество оплодотворенных ооцитов и на 8,5% Мо-В1. Выход ранних зародышей на предимплатационных стадиях, по отношению к общему количеству поставленных в первом опыте ооцит-кумулюсных комплексов, снизился на 5,1%.
Таким образом, оптимальная продолжительность совместного инкубирования спермотозоидов с яйцеклетками составляет 18-20 часов и которая позволяет получать 57,4% дробящихся и увеличить выход зародышей на стадии морулабластоцистадо 36,8%.
Таблица 107 - Выход жизнеспособных эмбрионов в зависимости от продолжительности оплодотворения
| Продолжительность совместной инкубации спермы с ооцитами, ч | Оплодотворено ооцитов, п | Дробящихся зародышей | Выход Мо-В1 | ||
|---|---|---|---|---|---|
| n | % | n | % | ||
| 3,0 | 174 | 26 | 14,9 | 5 | 19,2 |
| 3,1-6,0 | 187 | 32 | 17,1 | 6 | 18,7 |
| 6,1-9,0 | 180 | 50 | 27,8 | 11 | 22,0 |
| 9,1-12,0 | 191 | 62 | 32,5 | 20 | 32,2 |
| 12,1-15,0 | 160 | 64 | 40,0 | 19 | 29,7 |
| 15,1-18,0 | 171 | 81 | 47,4 | 26 | 32,1 |
| 18,1-20,0 | 204 | 117 | 57,4 | 43 | 36,8 |
| 20,1-24,0 | 157 | 86 | 54,8 | 25 | 29,1 |
11.4. Сравнительная эффективность получения эмбрионов путем трансцервикальной аспирации (ОРU) и из яичников доноров убитых на мясокомбинате
Выделение ооцитов проводилось одним из двух методов: 1 - трансцервикальное отсасывание ооцитов из фолликулов доноров с использованием ультразвукового зонда или его еще
называют ультросонографом; 2 - из яичников убитых на мясокомбинате коров.
Полученные эмбрионы пересаживались или подвергались криокон-сервации. Результаты этой работы представлены в таблице 108, из которой видно, что за 418 операций по отсасыванию было получено всего 3429 ооцит-кумулюсных комплексов (ОКК) или по 8,2 ОКК на одну операцию. Пригодными для постановки на дальнейшее созревание оказалось 2092 ОКК или 61%. После оплодотворения и культивирования ранних зародышей в течение 7...9 дней было получено 717 жизнеспособных эмбрионов, что составило 1,72 зародыша на операцию.
Таблица 108 - Результаты работы по получению эмбрионов вне организма с использованием технологии ОРU
| Количество операций, п | Получено ОКК | Пригодных для созревания | Получено эмбрионов | |||
|---|---|---|---|---|---|---|
| всего | на одну операци ю | N | % | всего | на одну операцию | |
| ОРU 418 | 3429 | 8,2 | 209 2 | 61 | 717 | 1,72 |
| м/к 77 | 6890 | 89,5 | 489 8 | 71,1 | 1768 | 22,9 |
Анализ эффективности использования ооцитов, полученных из яичников коров, убитых на мясокомбинате, показывает, что всего за 77 циклов (одна поездка на м/к) получено 6890 ооцитов или 89,5 ооцита на один цикл. Из них пригодных для дальнейшего созревания оказалось 4898 или 71,1%, что на 10,1% выше по сравнению с трансцервикальным получением женских гамет.
Из поставленных на созревание ооцитов было получено 1768 жизнеспособных эмбрионов или 22,9 на один цикл. Выход
