случаев, хорошие – в 22,1%, а удовлетворительные – в 41,4%. Доля эмбрионов отличного качества уменьшалась после оттаивания в 2,2 раза, а число зародышей удовлетворительного качества увеличивалось в 3 раза.
От пересадки эмбрионов отличного качества уровень стельности был в 1,4 раза выше, чем от пересадки эмбрионов удовлетворительного качества.
В центре трансплантации эмбрионов крупного рогатого скота Всероссийского НИИ животноводства /54/ было заморожено 478 эмбрионов, сохранность которых составила 84%. При замораживании эмбрионов отличного и хорошего качества процент пригодных к пересадке эмбрионов составил 89,6%. Однако, отличные по качеству зародыши сохранили свой статус только в 15,4% случаев, в то время как 60% эмбрионов перешли в разряд хороших, а 19,2% дегенерировали. Заметно лучше переносили пониженные температуры эмбрионы, которые перед заморозкой были оценены как хорошие. Так, из 213 эмбрионов хорошего качества 51,2% сохранили после оттаивания свое качество. Одним из критериев оценки жизнеспособности зародышей является соответствие их возраста той стадии развития, на которой они находились во время извлечения.
В ряде исследований /95/ установлено, что у поздних бластоцист приживляемость была более высокой (41,7%) против 32% у морул и 39% ранних бластоцист. В исследованиях Frim, J. /157/ сохранность поздних бластоцист составила 100%. Ishida T. и др. /182/ отмечают, что более устойчивыми к криоконсервации являются хорошие бластоцисты, 85% которых сохранили свою жизнеспособность и дали 50% стельностей против 38% сохранившихся в хорошем состоянии морул. Мадисон В. и др. /54/ при заморозке ранних бластоцист получили 80,9% сохранности, морул – 77,3%.
Отмечается, что эмбрионы крупного рогатого скота и коз на стадии поздней морулы и ранней бластоцисты более пригодны для криоконсервации, чем экспандированные бластоцисты. После пересадки в первом случае получено 62,5%
стельностей по отношению к 52,9% во втором. В свою очередь, экспандированные бластоцисты на начальной стадии выхода из зоны пеллюцида также показали более высокий уровень сохранности, нежели экспандированные бластоцисты (23,8% против 21,9%). Эмбрионы крупного рогатого скота можно криоконсервировать и на более ранних стадиях развития так же, как и их половинки, помещенные в зону пеллюцида.
В своих более поздних исследованиях Смыслова Н. и др. /160/ указывают на то, что эмбрионы от поздней морулы до поздней бластоцисты одинаково выдерживают глубокое замораживание и стадия их развития не является критическим фактором для приживляемости эмбрионов.
В свою очередь Сергеев Н. и др. /90/, получивший более высокие показатели по сохранности ранних бластоцист, делает предположение о том, что более низкая выживаемость поздних морул объясняется наличием трех-четырех слоев клеток и плотным межклеточным контактом, что затрудняет проникновение криопротектора и выход воды. Образование бластоцели облегчает протекание обменных процессов и увеличивает криорезистентность эмбрионов на стадии ранней бластоцисты. Однако, с дальнейшим развитием зародыша количество клеток возрастает, межклеточные контакты в эмбриобласте увеличиваются, и транспорт веществ во внутренних слоях замедляется, что требует применения для криоконсервации эмбрионов поздних стадий таких же методов, как для криоконсервации тканевых структур.
Основополагающим фактором, оказывающим самое непосредственное влияние на сохранность и последующую приживляемость замороженно-оттаянных эмбрионов, является криопротектор. Как было сказано выше, криопротекторы можно разделить на две большие группы, проникающие в клетку (ДМСО, глицерин, этиленгликоль) и непроникающие (сахароза и ряд других сахаров).
Сравнительный анализ ДМСО (диметилсульфоксид) и глицерина показал, что при использовании первого у крупного рогатого скота получено 84,6% пригодных к пересадке
зародышей. Криозащитные свойства глицерина оказались менее эффективными. Его использование при криоконсервации увеличивало выход дегенерированных эмбрионов до 39,3%. Эрнст Л., Сергеев Н. /113/ также отмечают тот факт, что для глубокого замораживания эмбрионов наиболее подходящими являются ДМСО и глицерин в концентрации 1,5 М и 1,0-1,4 М, соответственно.
Однако, дальнейшими исследованиями было установлено, что глицерин является менее токсичным по сравнению с ДМСО. В опытах Massip A. /211/ семидневные эмбрионы замораживали в 1,5 М растворе ДМСО и 1,37М глицерине. В первом случае среди замороженных 75,9% зародышей сохранили свою жизнеспособность. Их приживляемость после пересадки составила 35%. Во втором случае эти показатели составили 75% и 52,6%, соответственно.
Что касается концентрации глицерина при насыщении эмбрионов, то наиболее эффективными показали себя 1,4 М растворы глицерина на основании фосфатного буфера. Так, при использовании в качестве криопротектора 1,4 М глицерина приживляемость эмбрионов после пересадки составила 40,6%, а при использовании 1,0М – 27,3% /95/. Аналогичные результаты были получены и в исследованиях других авторов /72/, результаты опытов которых показали, что при использовании как одной, так и другой концентрации сохранность оставалась практически одинаковой 95,9 и 95,6%, приживляемость при использовании в качестве криопротектора 1,4М глицерина составила 40,8%, а при использовании 1,0 М раствора этот показатель находился на уровне 37,1%.
Особый интерес при криоконсервации эмбрионов представляет использование сахарозы, которая значительно ускоряет и упрощает подготовку эмбрионов к пересадке, а производительность труда повышает в 2 раза. При этом сохранность эмбрионов остается на высоком уровне.
Так, исследования некоторых авторов /54, 61/ показали, что использование сахарозы в концентрации 0,7М при удалении криопротектора позволяет сохранить жизнеспособность
