80,0...87,5% эмбрионов, а приживляемость таких эмбрионов составляет 55,6%.
Самоделкин А. /85/ считает, что применение сахарозы при подготовке эмбрионов к замораживанию и оттаиванию позволяет получить до 87,7% жизнеспособных эмбрионов и повысить их приживляемость до 55,8%.
Использование сахарозы при криоконсервации позволило Niemann H. /224/ увеличить сохранность эмбрионов на 23,3%.
Исследования ряда последних лет направлены на поиск путей, упрощающих процесс криоконсервации и позволяющих сократить время на данный технологический процесс.
Одним из таких путей является поиск и применение новых криозащитных веществ, которые выгодно бы отличались от ДМСО и глицерина. Наиболее перспективным в данном отношении в настоящее время является этиленгликоль, криозащитные свойства которого, как оказалось, близки к таковым глицерина.
Анализ результатов работы по замораживанию эмбрионов с использованием этиленгликоля показал, что, хотя сохранность эмбрионов и была невысокая (68,7%), приживляемость находилась на уровне 55% /85/.
Высокие криозащитные свойства этиленгликоля были отмечены в работе Lange H. /194/, который проводил свои опыты на интактных и демиэмбрионах. Результативность трансплантации интактных эмбрионов, замороженных в этиленгликоле, составила 58,2% против 48,2% при использовании в качестве криопротектора глицерина. Аналогичные результаты получены и в случае пересадок разделенных эмбрионов – 68,7 и 37,5%, соответственно.
Suzuki Т. et. al. /255/ сообщает о рождении 3 телят, полученных после пересадки замороженно-оттаянных эмбрионов, оплодотворенных и культивированных вне организма. Авторы считают, что значительную роль в этом сыграл примененный в эксперименте криопротектор этиленгликоль в 1,8М концентрации в комплексе с поливинилпирролидоном.
Эмбрионы свиней по неясным пока причинам невозможно криоконсервировать с удовлетворительным результатом.
Таким образом, из выше сказанного следует вывод о высоких криозащитных свойствах этиленгликоля. В дополнение к этому использование этиленгликоля в качестве криопротектора позволяет проводить так называемые прямые пересадки ("direct transfer"), т.е. проводить пересадки эмбрионов реципиенту сразу после оттаивания без предварительного удаления криопротектора и оценки качества зародыша, что является значительным шагом вперед на пути упрощения технологии трансплантации замороженно-оттаянных эмбрионов и приближает ее по простоте исполнения к искусственному осеменению.
Процесс криоконсервации растянут во времени и продолжается в пределах 2,5...3 часов, что создает определенные трудности и неудобства. Поэтому в последние годы исследования многих ученых направлены на поиск путей, способных сократить затраты времени на криоконсервацию. Наиболее перспективный в этом отношении метод витрификации эмбрионов, сущность которого заключается в насыщении зародышей комплексом криопротекторов в высоких концентрациях с последующим кратковременным охлаждением и погружением в жидкий азот. Криоконсервация в таком случае проводится без программных замораживателей и специальных устройств. Этот способ позволяет сократить продолжительность замораживания до нескольких минут.
По оценкам некоторых исследователей /118, 211, 237/, метод витрификации позволяет получить уже на данном этапе разработки достаточно высокие результаты сохранности и приживляемости зародышей – 70-90 и 57,1%, соответственно.
По некоторым данным /146/, постепенное насыщение зародыша криопротектором до концентрации 40% позволяет получить до 66,7% жизнеспособных эмбрионов и при этом сохранить их приживляемость на уровне эмбрионов, замороженно-оттаянных по традиционному методу. В исследованиях Wilmut J. /274/ выживаемость эмбрионов,
замороженных таким образом, составила 86,8%. Данные результаты подтверждаются работами ряда других исследователей /234, 235/, в опытах которых было установлено, что витрификация позволила сохранить жизнеспособность эмбрионов в 70...87% случаев, а их приживляемость после пересадки составляла от 39,1% до 57,1%. Опыты по совершенствованию витрификационных растворов позволили добиться хороших результатов /146, 213/. В своих работах эти авторы использовали для замораживания и оттаивания эмбрионов 0,5М сахарозу и витрификационный раствор. Приживляемость эмбрионов, замороженных по такой методике, составила 44,8%, а в контроле – 53,5%, в другом случае сохранность эмбрионов удалось увеличить до 85,2%, а приживляемость – до 55,1%.
При криоконсервации важным условием сохранения зародышей является подбор оптимального режима замораживания, который бы позволил проводить обезвоживание клеток с наименьшими потерями для самих эмбрионов.
Медленное замораживание зародышей предусматривает и медленное их оттаивание, что способствует медленному проникновению воды в клетку и исключает повреждение мембран клеток вследствие быстрой регидратации (набухания).
Быстрое замораживание требует и быстрого оттаивания, потому что медленное оттаивание таких эмбрионов может вызвать рекристаллизацию и повреждение клеток /213/. Наиболее оптимальная скорость охлаждения для большинства типов клеток составляет 1 ° С/мин. Однако, оптимальная скорость охлаждения, обеспечивающая оптимальный уровень выживаемости, варьирует как для эмбрионов различных видов животных, так и в зависимости от стадии развития эмбрионов одного и того же вида животного /113/.
Существующие медленный и ускоренный режимы замораживания позволяют получать от 40 до 80% пригодных к пересадке эмбрионов и 30...45% стельностей после пересадки /95, 197, 263/. Согласно исследованиям этих же авторов охлаждение с минус семи до минус двадцати пяти градусов со
