рогатого скота и получения на этой основе эмбрионов, пригодных для пересадки, вопросы получения, оценки, созревания и оплодотворения ооцитов, подготовки спермы к оплодотворению вне организма, культивирование ранних зародышей до настоящего времени остаются открытыми.
В настоящее время получение эмбрионов вне организма животных прочно занимает одно из ведущих мест в комплексе биотехнических направлений ускоренного размножения сельскохозяйственных животных. Разработка новой биотехнологии, в которой сочетаются трансплантация эмбрионов, культивирование и оплодотворение ооцитов т укго, а также трансплантация эмбрионов полученных таким образом не только существенно повысит потенциал гамет в расчете на одну племенную корову, но и позволит достоверно оценить генотип и, следовательно, резко увеличить генетический прогресс в популяции. Получение на этой основе большого числа эмбрионов крайне важно для создания банка эмбрионов, а в последствии и многочисленных семейств выдающихся по продуктивности животных.
В настоящее время разработаны методы, позволяющие выделять из яичников коров до 200 ооцитов, культивировать их и оплодотворять in vitro. Однако выход биологически полноценных эмбрионов остается низким, поэтому продолжаются интенсивные исследования с использованием современных биологических методов.
Оплодотворение ооцитов in vitro достигнуто у 20 видов млекопитающих. В 1968 г. появилось первое сообщение о нормальном потомстве, полученном от мышей, в 1974 г. - от крыс, в 1981 г. - от человека и крупного рогатого скота, в 1983 г. - от свиней и в 1984 г. - от овец..
В Республике Беларусь первый теленок из эмбриона, полученного в культуре in vitro был получен в 1995 сотрудниками лаборатории генетики и разведения крупного рогатого скота БелНИИЖ на базе на базе Брестского ГПП
Благодаря достигнутому за последние 20 лет прогрессу в понимании сложных процессов, связанных с культивированием
in vitro экстракорпоральным оплодотворением ооцитов и эмбриональным развитием млекопитающих, появилась возможность существенно усовершенствовать метод оплодотворения вне организма.
11.1. Факторы, влияющие на эффективность технологии in vitro
11.1.1. Взаимосвязь морфофункционального состояния яичников и способа выделения ооцитов с эффективностью получения эмбрионов in vitro
| Как показали наши исследования, созревания ооцитов и выход | эффективность эмбрионов | на |
|---|---|---|
| предимплантационных стадиях морфофункциональным состоянием физиологическим состоянием доноров. | взаимосвязана яичников | с и |
Данные по морфологическим показателям яичников, использованных в процессе получения эмбрионов в культуре in vitro (табл. 84) показали, что длина яичников находилась в прямой зависимости от их объема и колебалась от 26,5±1,44 мм (объемом до 4,0 см ) до 39,4±1,6 мм (объемом более 8,0 см ). Аналогичная картина наблюдалась и при анализе данных о ширине яичников, которая колебалась от 15,4±0,97 (объемом до 4,0 до 25,5±1,23 (объемом более 8,0 см).
Таблица 84 - Морфологические показатели яичников, использованных для получения эмбрионов in vitro
| Объем яичника, см3 | Длина яичника, мм | Ширина яичника, мм |
|---|---|---|
| До 4.0 (п=13) | 26,5±1,44 | 15,4±0,97 |
| 4,1-6,0 (п=20) | 29,4+1,35 | 18,9+0,78** |
| 6,1-8,0 (п=20) | 32,5+1,58** | 21,1+0,96*** |
| Более 8,0 (п=16) | 39,4+2,05*** | 25,5±1,23*** |
Таким образом, средние параметры, использованных нами
яичников выглядели следующим образом: объем - 6,9±0,28 см3, длина яичников -31,9±1,61 мм, ширина яичников 20,2+0,99 мм.
При анализе функциональной характеристики яичников мы учитывали такие показатели как количество, качество и размер фолликулов, наличие циклического желтого тела, персистентного желтого тела, наличие кист, желтого тела беременности, гипофункцию яичников.
Взаимосвязь объема яичников с количеством фолликулов и их размерами, а также количеством и качеством ооцитов представлены в таблице 85. Количество антральных фолликулов в зависимости от объема яичников колебалось от 20,2±1,5 при объеме яичника до 4,0 см3 до 29,0±1,2 при объеме яичника 6,18,0 см3. Среднее количество антральных фолликулов на яичник составило 25,7±1,8. Что касается диаметра фолликулов, то здесь складывается следующая картина. Так, при объеме яичника до 4,0 см3 количество антральных фолликулов диаметром до 4 мм составляло 13,6±1,35, свыше 4,0 - 7,6±0,92. При объеме яичника 4,1-6,0 см3 данные показатели выглядели следующим образом: количество антральных фолликулов диаметром до 4,0 мм составляло 17,3+1,14, диаметром свыше 4,0 мм – 8,5±1,0. При объеме яичников 6,1-8,0 см3 и свыше 8,0 мм3 19,8+1,61; 9,7±1,13 и 22,4+2,83; 7,5+1,3, соответственно. Среднее количество фолликулов диаметром до 4,0 мм составляло 18,3+1,73, свыше 4,0 мм 8,3±1,1. В целом количество антральных фолликулов на один яичник составило 13,3±1,4.
Анализ приведенных данных по установлению взаимосвязи количества и размеров фолликулов с количеством и качеством полученных ооцитов показывает, что уровень выхода клеток колебался от 19,3 - 19,6 до 34,0. Причем отмечена достоверная разница по выходу ооцитов между яичниками объемом до 4,0 - 4,1-6,0 см3 по сравнению с яичниками объем, которых составил 6,1-8,0 см3 . В среднем количество ооцитов составило 26,7±3,86. Аналогичная тенденция наблюдалась и по выходу качественных ооцитов. Так, выход клеток у яичников объемом 4,1-6,0 см3 превышал аналогичный показатель яичников диаметром до 4,0; 6,1-8,0 и выше 8,0 см3 на 3,9;8,7 и
