Воспроизводство крупного рогатого скота

Более высокие концентрации общего кальция в плазме бычьего семени, чем в сперматозоидах, в основном связаны с гораздо более высокой концентрацией комплексного кальция ( в комплексе с органическими и неорганическими кислотами) в семенной плазме. Концентрация связанного с белком кальция была примерно одинаковой в сперматозоидах и семенной плазме, тогда как концентрации ионизированного кальция были ниже в семенной плазме, чем в сперматозоидах. Холодный шок значительно увеличил концентрацию общего кальция в сперматозоидах из-за увеличения содержания комплексного и белково-связанного кальция и, соответственно, снизил общий кальций в семенной плазме из-за уменьшения содержания ионизированного кальция. Напротив, не было никакого увеличения кальция в сперматозоидах после медленного охлаждения.

Холодный шок возникает чаще всего тогда, когда осеменение проводится в холодную погоду, особенно когда используется теплая водяная баня. Высокое соотношение поверхности пайеты к объему делает ее уязвимой для холода. Saacke¹⁵ , используя 0,5-мл французскую соломку, измерил влияние статических температур окружающей среды (21,4 и 16 °C) на скорость падения температуры спермы после оттаивания во время приготовления осеменительного шприца (Таблица 32.3). Падение температуры составляло всего 3–6 °C при температуре окружающей среды 21 °C; кроме того, предварительное нагревание шприца эффективно препятствовало падению температуры. Однако, во время подготовки семени при температуре окружающей среды 4 и 16 °С температура капель спермы составляла 15 и 20 °С, соответственно, и подготовка шприца к осеменению при этих двух температурах лишь откладывала спад температуры. Очевидно, что для избежания холодного шока во время подготовки катетера для осеменения в прохладной среде должны быть приняты меры предосторожности.

Советы по предотвращению температурного шока в холодную погоду

• Выполняйте оттаивание спермы и загрузку шприц-катетера для ИО в закрытом отапливаемом помещении, расположенном рядом с животным, подлежащим осеменению. Затем изолируйте шприц для ИО, поместив его под одежду или в термопенал, и отнесите к станку для осеменения.

• Выполняйте подготовку инструмента для ИО и осеменение в закрытом отапливаемом помещении.

• Используйте термопенал для шприца ИО. Термопенал представляет

• собой переносной обогреваемый футляр с регулируемой температурой, который поддерживает несколько заряженных шприцов ИО при температуре 35 ° C.

Советы по извлечению, оттаиванию и обработке пайеты с семенем

Для получения оптимальных результатов замороженную сперму следует осторожно обрабатывать и размораживать. Оборудование для осеменения должно быть чистым и сухим (включая обрезчик для пайет, который часто сильно пачкается). Термометр должен регулярно использоваться для контроля температуры воды в термостате, особенно когда одновременно оттаивают несколько соломинок. Термометр следует периодически проверять на точность (не реже одного раза в 6 месяцев).

При извлечении соломинки из сосуда Дьюра осторожно встряхните ее, чтобы удалить избыток жидкого азота, который может оставаться в ватной пробке, и быстро поместите в воду при 35°C для оттаивания в течение не менее 45 с. Время размораживания должно отслеживаться по часам. Во время оттаивания спермы предварительно разогрейте шприц, энергично потерев его чистым бумажным полотенцем или поместив рядом с телом на несколько минут перед загрузкой. После завершения оттаивания удалите пайету из воды и вытрите насухо бумажным полотенцем. Защитите пайету от солнечного света и быстрого охлаждения. Соломинка следует удерживать обжимом вертикально и аккуратно постукивать, чтобы небольшое воздушное пространство находилось рядом с обжимом. Поместите конец хлопковой пробки соломинки в шприц ИО для обрезки пайет. Для обрезки пайет должны использоваться только чистые острые ножницы или специальный обрезчик. Обрезать следует перпендикулярно длинной оси, приблизительно ниже гофрированного уплотнения, для достижения хорошего уплотнения с корпусом шприца. Наденьте пластиковый чехол на шприц с соломинкой и надежно соедините чехол и шприц. Осмотрите конец соломинки пистолета, чтобы убедиться в отсутствии зазора между чехлом и пайетой. Заряженный шприц для осеменения заверните в чистое бумажное полотенце или оденьте на катетер полиэтиленовую санитарную рубашку, чтобы обеспечить как тепловую, так и гигиеническую защиту, затем поместите шприц под одежду или в термопенал для транспортировки к животному. Интервал от изъятия пайеы из сосуда Дьюара до искусственного осеменения не должен превышать 15 мин.

Осеменение

Более высокая фертильность требует правильных методов оплодотворения. Для ИО крупного рогатого скота было разработано несколько методов осеменения: осеменение в тело матки, двустороннее осеменение в оба рога, глубокое осеменение рога матки и внутрифолликулярное осеменение.

Таблица 32.3 Температура спермы (°C) в 0,5 мл французской соломинке после оттаивания в термостате при 35 ° C во время подготовки шприца ИО при 21, 16 и 4 °C.

a Подготовка шприца-ИО от оттаивания до помещения в термопенал заняла примерно 1 мин.

b Шприц-ИО был нагрет быстрым трением рукой (нагретый) или выдерживался при температуре окружающей среды (холодный). Источник: адаптировано из Saacke R. Концепции фасовки и использования спермы. В кн .: Материалы 8-ой конференции по ИО мясного скота NAAB , 1994, с. 15.

Наиболее распространенный подход заключается в использовании ректоцервикальной техники введения спермы в тело матки, непосредственно за внутренней частью шейки матки. Осеменение в тело и рога матки требует умения проходить катетером шейку матки. Для этого существуют различные учебные программы. Например, многие специалисты по искусственному осеменению предлагают интенсивное обучение в течение 3-5 дней или предоставляют инструкции для людей на ферме. Большинство сельскохозяйственных колледжей посвящают целый курс или часть курса технике ИО. Тем не менее, интенсивность обучения и конкретные рекомендации, данные участникам, значительно варьируются в зависимости от учебных программ. Развитие навыка прохождения через шейку матки не должно быть единственной целью программы обучения ИО. Наряду с овладением цервикальным проникновением, следует подчеркнуть важность санитарии и оттачивания навыка последовательного определения правильного места введения спермы и правильности самого процесса введения. Кроме того, слушатели должны получить практические знания по репродуктивной анатомии и понимать основы программы рационального репродуктивного управления. Неспособность понять анатомические и функциональные взаимоотношения различных тканей и органов репродуктивной системы коровы может привести к ошибкам при осеменении. Заряженный шприц ИО помещается в гигиенический пластиковый чехол для защиты от влагалищного загрязнения (Рисунок 32.1). Корова должна быть надлежащим образом зафиксирована, чтобы минимизировать стресс (поскольку повышенные концентрации кортизола в крови будет подавлять выброс лютеинизирующего гормона). Руку в полиэтиленовой перчатке вводят в прямую кишку, нащупывают шейку матки и крепко захватывают ее (рис. 32.2). Вульву очищают бумажным полотенцем, катетер шприца в защитном чехле вводят до влагалищного отверстия шейки матки (рис. 32.3). Прорывают санитарный чехол (Рисунок 32.6), и инструмент продвигают через шейку матки к основанию тела матки.

Следует избегать попадания катетером в уретральное отверстие, влагалищную складку и влагалищный свод. Чтобы избежать проникновения в отверстие уретры (на дне влагалища), вставьте осеменительный шприц в вульву под углом 30–40°. Свод влагалища имеет тенденцию довольно легко растягиваться, когда инструмент для ИО выдвигается вперед за шейку матки. Это может создать ложное впечатление о том, что катетер продвигается через шейку матки, когда на самом деле он находится выше, ниже или сбоку от от шейки матки (Рисунок 32.4). Однако, в этом случае практик будет чувствовать стержень во влагалищной складке (Рисунок 32.5). Когда стержень находится в шейке матки, его кончик не ощущается. Гигиенический чехол прорывается (Рисунок 32.6), и инструмент продвигается через шейку матки к основанию тела матки.

Как правило, есть три "скошенных" шейных кольца, через которые должен пройти катетер; катетер продвигается путем манипулирования шейкой матки и поддержания постоянного давления на инструмент (Рисунок 32.7). Следует проявлять осторожность, чтобы не зацепить кончиком стержня цервикальные складки. Целевое место введения спермы находится внутри тела матки. Поскольку тело матки довольно маленькое, точное размещение шприца ИО имеет первостепенное значение. Как правило, это место идентифицируется по ощущению внутреннего отверстия шейки матки и кончика шприца ИО, когда он проходит через внутреннее отверстие и входит в тело матки (рис. 32.8). Наконечник катетера должен быть расположен так, чтобы он находился примерно на 1 см впереди от внутреннего отверстия (Рисунки 32.9 и 32.10); это можно проверить кончиком указательного пальца руки через стенку прямой кишки. После того, как инструмент для осеменения правильно расположен, шейку матки следует держать параллельно продольной оси коровы, и вводить сперму в течение примерно 5 с. Медленное введение способствует попаданию максимального количества спермы из пайеты в нужное место, и сводит к минимуму неравномерное попадание спермы в один маточный рог. Во время процесса введения семени необходимо следить за тем, чтобы пальцы пальпирующей руки случайно не блокировали рог матки или каким-либо образом не перенаправляли поток спермы. Следует проявлять осторожность, чтобы во вемя введения семени не затягивать шприц ИО обратно в шейку матки. Если корова движется во время введения спермы или если катетер выскальзывает, снова переместите катетер в правильное место.

Несмотря на то, что по стандарту рекомендуется вводить семя в тело матки, бикорнуальное ( в оба рога) осеменение не приводит к изменению фертильности^16,17 или ее улучшению.¹⁸ Andersson и соавт.¹⁹ сообщили о сходных показателях оплодотворяемости при осеменении в ипсилатеральный рог (со стороны яичника с преовуляторным фолликулом) более низкой дозой семени (2 миллиона сперматозоидов) по сравнению с осеменением в тело матки нормальной дозой (15 миллионов сперматозоидов); однако, фертильность была снижена при более низких дозах введенных в тело или в оба рога матки, по сравнению с осеменением более высокими дозами. Следует отметить, что осеменение в верхушку рога не увеличивало степень задержки сперматозоидов по сравнению с осеменением в тело матки. Хотя факторы, контролирующие транспорт и удержание сперматозоидов, весьма сложны, ясно, что ретроградный (обратный ) транспорт сперматозоидов происходит независимо от места введения.

Verberckmoes и др. в Бельгии разработали новое устройство для искусственного осеменения (устройство Гента) для осаждения спермы вблизи маточно-трубного перехода у крупного рогатого скота. Влияние данного места введения спермы на фертильность тестировали осеменением в тело матки дозой в 12 миллионов сперматозоидов с использованием традиционного метода (контрольное введение) или осеменением с уменьшенной дозой сперматозоидов (4 миллиона), депонированных таким же образом, как при контрольном или двустороннем введении вблизи маточно-трубного перехода с помощью устройства Гента.