Наиболее распространенный подход заключается в использовании ректоцервикальной техники введения спермы в тело матки, непосредственно за внутренней частью шейки матки. Осеменение в тело и рога матки требует умения проходить катетером шейку матки. Для этого существуют различные учебные программы. Например, многие специалисты по искусственному осеменению предлагают интенсивное обучение в течение 3-5 дней или предоставляют инструкции для людей на ферме. Большинство сельскохозяйственных колледжей посвящают целый курс или часть курса технике ИО. Тем не менее, интенсивность обучения и конкретные рекомендации, данные участникам, значительно варьируются в зависимости от учебных программ. Развитие навыка прохождения через шейку матки не должно быть единственной целью программы обучения ИО. Наряду с овладением цервикальным проникновением, следует подчеркнуть важность санитарии и оттачивания навыка последовательного определения правильного места введения спермы и правильности самого процесса введения. Кроме того, слушатели должны получить практические знания по репродуктивной анатомии и понимать основы программы рационального репродуктивного управления. Неспособность понять анатомические и функциональные взаимоотношения различных тканей и органов репродуктивной системы коровы может привести к ошибкам при осеменении. Заряженный шприц ИО помещается в гигиенический пластиковый чехол для защиты от влагалищного загрязнения (Рисунок 32.1). Корова должна быть надлежащим образом зафиксирована, чтобы минимизировать стресс (поскольку повышенные концентрации кортизола в крови будет подавлять выброс лютеинизирующего гормона). Руку в полиэтиленовой перчатке вводят в прямую кишку, нащупывают шейку матки и крепко захватывают ее (рис. 32.2). Вульву очищают бумажным полотенцем, катетер шприца в защитном чехле вводят до влагалищного отверстия шейки матки (рис. 32.3). Прорывают санитарный чехол (Рисунок 32.6), и инструмент продвигают через шейку матки к основанию тела матки.
Следует избегать попадания катетером в уретральное отверстие, влагалищную складку и влагалищный свод. Чтобы избежать проникновения в отверстие уретры (на дне влагалища), вставьте осеменительный шприц в вульву под углом 30–40°. Свод влагалища имеет тенденцию довольно легко растягиваться, когда инструмент для ИО выдвигается вперед за шейку матки. Это может создать ложное впечатление о том, что катетер продвигается через шейку матки, когда на самом деле он находится выше, ниже или сбоку от от шейки матки (Рисунок 32.4). Однако, в этом случае практик будет чувствовать стержень во влагалищной складке (Рисунок 32.5). Когда стержень находится в шейке матки, его кончик не ощущается. Гигиенический чехол прорывается (Рисунок 32.6), и инструмент продвигается через шейку матки к основанию тела матки.
Как правило, есть три "скошенных" шейных кольца, через которые должен пройти катетер; катетер продвигается путем манипулирования шейкой матки и поддержания постоянного давления на инструмент (Рисунок 32.7). Следует проявлять осторожность, чтобы не зацепить кончиком стержня цервикальные складки. Целевое место введения спермы находится внутри тела матки. Поскольку тело матки довольно маленькое, точное размещение шприца ИО имеет первостепенное значение. Как правило, это место идентифицируется по ощущению внутреннего отверстия шейки матки и кончика шприца ИО, когда он проходит через внутреннее отверстие и входит в тело матки (рис. 32.8). Наконечник катетера должен быть расположен так, чтобы он находился примерно на 1 см впереди от внутреннего отверстия (Рисунки 32.9 и 32.10); это можно проверить кончиком указательного пальца руки через стенку прямой кишки. После того, как инструмент для осеменения правильно расположен, шейку матки следует держать параллельно продольной оси коровы, и вводить сперму в течение примерно 5 с. Медленное введение способствует попаданию максимального количества спермы из пайеты в нужное место, и сводит к минимуму неравномерное попадание спермы в один маточный рог. Во время процесса введения семени необходимо следить за тем, чтобы пальцы пальпирующей руки случайно не блокировали рог матки или каким-либо образом не перенаправляли поток спермы. Следует проявлять осторожность, чтобы во вемя введения семени не затягивать шприц ИО обратно в шейку матки. Если корова движется во время введения спермы или если катетер выскальзывает, снова переместите катетер в правильное место.
Несмотря на то, что по стандарту рекомендуется вводить семя в тело матки, бикорнуальное ( в оба рога) осеменение не приводит к изменению фертильности16,17 или ее улучшению.18 Andersson и соавт.19 сообщили о сходных показателях оплодотворяемости при осеменении в ипсилатеральный рог (со стороны яичника с преовуляторным фолликулом) более низкой дозой семени (2 миллиона сперматозоидов) по сравнению с осеменением в тело матки нормальной дозой (15 миллионов сперматозоидов); однако, фертильность была снижена при более низких дозах введенных в тело или в оба рога матки, по сравнению с осеменением более высокими дозами. Следует отметить, что осеменение в верхушку рога не увеличивало степень задержки сперматозоидов по сравнению с осеменением в тело матки. Хотя факторы, контролирующие транспорт и удержание сперматозоидов, весьма сложны, ясно, что ретроградный (обратный ) транспорт сперматозоидов происходит независимо от места введения.
Verberckmoes и др. в Бельгии разработали новое устройство для искусственного осеменения (устройство Гента) для осаждения спермы вблизи маточно-трубного перехода у крупного рогатого скота. Влияние данного места введения спермы на фертильность тестировали осеменением в тело матки дозой в 12 миллионов сперматозоидов с использованием традиционного метода (контрольное введение) или осеменением с уменьшенной дозой сперматозоидов (4 миллиона), депонированных таким же образом, как при контрольном или двустороннем введении вблизи маточно-трубного перехода с помощью устройства Гента.
Авторы пришли к выводу, что ни дозировка сперматозоидов, ни место отложения спермы не влияли на уровень стельности.
Интрафолликулярное осеменение определяется как прямое введение суспензии сперматозоидов небольшого объема (0,06 мл) в преовуляторный фолликул. Этот метод рекомендован в качестве альтернативы обычной процедуре введения спермы в матку для коров с низкой фертильностью.21 Несмотря на то, что результаты сходны с внутриматочной инсеминацией у небольшой группы коров, необходимы дальнейшие исследования для определения эффективности этого метода.
Было исследовано несколько методов, направленных на усиление транспорта сперматозоидов после осеменения, включая введение простагландина (PG)F2α во время осеменения и массаж клитора сразу после осеменения. Введение аналога PGF2α во время осеменения улучшило фертильность у телок по сравнению с необработанными контрольными животными, но не у коров.22 Cooper и соавт.23 сообщили об отсутствии улучшения показателей оплодотворяемости, когда после осеменения выполнялся 5- секундный клиторальныйй массаж.
Сроки осеменения
Правильное обнаружение эструса имеет решающее значение для успеха ИО. Рефлекс неподвижности или «охота», является наиболее надежным показателем того, что корова находится в эструсе. Исследования показали, что молочная корова имеет в среднем семь эпизодов эструса (допуска на себя садок других коров).24
Кроме того, коровы при эструсе проявляют половую активность в любое время суток, и поэтому крайне важно, чтобы визуальное наблюдение выполнялось несколько раз в день. Увеличение частоты визуального наблюдения увеличивает долю выявленных коров в охоте. Для оказания помощи производителям в обнаружении эструса было разработано несколько средств, включая краску для хвоста, пластыри Estrus Alert® и Kamar®, шагомеры и радиотелеметрические системы. Комбинация визуального наблюдения и одного или нескольких средств обнаружения повышает эффективность выявления охоты по сравнению с использованием только визуального наблюдения или только дополнительных средств выявления.
Овуляция обычно происходит приблизительно через 28–32 часа после начала эструса у молочных коров.25 Оптимальная фертильность яйцеклетки ориентировочно составляет от 6 до 12 часов после овуляции.26 Продолжительность жизни сперматозоидов в репродуктивном тракте оценивается в 24–30 часов.27,28 Ввиду этих ограничений есть лишь очень кратковременное окно для успешного оплодотворения.
В течение нескольких лет ученые исследовали оптимальное время осеменения коров относительно стадии эструса. На основе ранней работы выработана рекомендация по принципу «утро-вечер», и на основе этого руководства коров, выявленных в охоте в утренние часы следует осеменять в дневное время, а коров, выявленных в охоте во второй половине дня - осеменять на следующее утро.
