Воспроизводство крупного рогатого скота

Вакцинация не препятствует выделению дикого штамма, который уже присутствовал в организме. Колостральные антитела не предотвращают первичную репликацию вируса, и после снижения колострального иммунитета латентность может сохраняться. Животных из стад, где BHV является эндемичным, всегда следует рассматривать как потенциальный источник вируса.

Основными источниками инфекции являются носовые экссудаты и капли от кашля, препуциальный секрет, сперма, а также жидкости и ткани плода. Передача инфекции через выделения из влагалища или препуция (ИПВ или ИПБ) возможна, но менее эффективна.⁹ Крупный рогатый скот, зараженный BHV-1.1, экскретирует гораздо более высокие титры вируса с назальными жидкостями, чем скот, зараженный BHV-1.2b. Возможна венерическая передача через сперму во время естественного или искусственного осеменения.^10–15 Сперма, скорее всего, контаминируется во время эякуляции из препуция, а не в результате репликации вируса в яичке или добавочных половых железах. Быки могут начать выделять BHV-1 с секретом крайней плоти через 2–7 дней после первичного заражения. Быки могут стать периодическими распространителями инфекции на несколько месяцев или лет. Латентно инфицированные быки могут возобновить выделение патогена после стресса.¹⁶ Подозревают и механическую передачу через укусы клещей. Вакцинированные животные также могут выделять вирус BHV-1 после контакта с инфекцией, но на более низком уровне и в течение более короткого периода времени, чем непривитые животные. Максимальных последствий вспышки заболевания обычно достигают через 2–3 недели после введения в стадо носителей и заканчиваются к шестой неделе. Влияние болезни на стадо зависит от уровня естественного или приобретенного иммунитета.

Вирус BHV-1 может стать латентным после первичного инфицирования полевым изолятом или вакцинации аттенуированным штаммом и остается локализованным вблизи места его первой мультипликации (размножения) . Вирус обычно выявляется в ганглиях тройничного нерва при IBR и в сакральных спинальных ганглиях в случаях ИПВ/ИПБ (инфекционный пустулезный вульвовагинит/инфекционный пустулезный баланопостит) .¹⁷ Скрытно инфицированные животные выделяют BHV-1 из носовых, вагинальных или препуциальных секретов в период обострений. Транспортировка крупного рогатого скота с латентной инфекцией может реактивировать вирус, что приводит к возобновлению экскреции вируса и повышению уровня нейтрализующих антител. Ослабленные вакцинные штаммы могут оставаться в организме в латентном состоянии, а вакцинация не обеспечивает защиту от возникновения скрытой инфекции диким штаммом.^18,19 Вакцинация у латентно инфицированных животных не препятствует возобновлению экскреции дикого штамма.

Клинические проявления

Клинические симптомы BHV-1 часто появляются через 10–20 дней после естественного заражения и могут принимать одну из нескольких форм, включая респираторную (IBR), генитальную (IPV, IBP), глазную (конъюнктивит) или энцефаломиелитную.

IBR может протекать субклинически, в легкой или тяжелой форме. Заболеваемость и смертность могут приближаться к 100% и 10% соответственно. У пораженных животных наблюдается лихорадка (40–42 ° C), отсутствие аппетита, учащение дыхания, слюноотделение, одышка, постоянный резкий кашель, конъюнктивит, угнетение и сильное снижение молочной продуктивности. Изначально серозные назальные выделения становятся слизисто-гнойными по мере прогрессирования заболевания. Носовые поражения («красный нос») переходят от пустулезного некроза в крупные геморрагические и изъязвленные области, покрытые дифтерической пленкой (дифтерический вид фибринозного воспаления с образованием на поверхности органа фибриновой пленки) . Вторичная бактериальная или вирусная инфекция может привести к увеличению низкого уровня смертности. Животные могут проявлять признаки бронхита и пневмонии. Некоторые животные быстро выздоравливают в течение нескольких дней, становятся носителями и могут выделять вирус в течение длительного периода.

В легких случаях клинические признаки могут быть ограничены серозными выделениями из носа и глаз. В случаях вторичной бактериальной инфекции (Mannheimia haemolytica, Pasteurella multocida, Haemophilus somnus или Mycoplasma bovis) респираторные симптомы становятся более выраженными (дыхание с открытым ртом), и одновременно повышается риск смертности.

У пораженных животных в разной степени могут проявляться односторонний или двусторонний конъюнктивит с обильным слезотечением, фотофобией и эпифорой (эпифора или дакриорея - постоянное длительное патологическое слезотечение) . Распространена вторичная бактериальная инфекция, приводящая к гнойным выделениям, кератиту и изъязвлению роговицы. Стельные серонегативные коровы после заражения BHV-1, последующей виремии и летальной инфекции плода абортируют в последнем триместре.

Энцефалитная форма, вызванная BHV-5, характеризуется неврологическими признаками, включая нервозность, тремор мышц, нарушение координации, ведущее к атаксии и коме. Пораженные животные обычно умирают в течение 4 дней с момента появления неврологических признаков. У выздоравливающих животных обычно развивается слепота.

Генитальная форма заболевания

Известно, что помимо аборта вирус IBR вызывает ИПВ у коров и ИПБ у быков. Острая форма инфекции у наивных животных характеризуется лихорадкой, угнетением и анорексией в течение 1-3 дней после заражения. У самок наблюдается сильное и болезненное воспаление влагалища и вульвы. Пострадавшие животные часто становятся в позу как при мочеиспускании и постоянное подергивают или поднимают хвост из-за боли. Поверхность слизистой оболочки вульвы и преддверия влагалища гиперемирована и имеет небольшие (2–3 мм) приподнятые пустулы. По мере прогрессирования заболевания пустулы сливаются и образуют язвы. Слизисто-гнойные выделения могут начаться вследствие развития вторичной бактериальной инфекции. Поражения обычно заживают через 10–14 дней после начала заболевания, но гнойные выделения из влагалища могут сохраняться в течение нескольких недель.^13,20 Оплодотворение животных спермой, зараженной BHV-1, может вызывать ИПВ, цервицит с обильными слизисто-гнойными выделениями, эндометрит и привести к плохой оплодотворяемости у коров. Экспериментальное заражение телок привело к оофориту, снижению функциональной активности ЖТ и ранним эмбриональным потерям.^15,21 У быков ИПБ характеризуется сходными поражениями на препуциальной слизистой оболочке и поверхности полового члена. У некоторых быков может наблюдаться сильный отек и выпадение слизистой оболочки препуция. Это часто приводит к осложнению вторичной бактериальной инфекцией с последующим развитием спаек. Выздоровление может наступить через 2 недели после развития клинических признаков. У некоторых быков может наблюдаться снижение либидо в течение нескольких недель. Реактивация и выделение вируса могут происходить у быковносителей во время спаривания. BHV-1 также ассоциируется с эпидидимитом и низким качеством спермы. Распространены легкая или субклиническая формы ИПВ/ИПБ.²⁰ Аборты из-за BHV-1 обычно происходят между 4 и 8 месяцами стельности после естественного инфицирования или вакцинации. Котиледоны обычно бледные с признаками разложения без каких-либо серьезных повреждений на абортированном плоде. Аборт происходит из-за гибели плода. Вирус может находиться в плаценте латентном состоянии до 3 месяцев, не передаваясь плоду. Аборт может произойти в течение 90 дней после вакцинации вакциной МЖВ.

Патофизиология

Респираторный синдром вызван размножением вируса в верхних дыхательных путях, что приводит к риниту, ларингиту и трахеиту. Синдром осложняется снижением устойчивости к вторичной бактериальной инфекции из-за M. haemolytica, P. multocida и H. somnus. Конъюнктивит возникает в результате контаминации через носослезный проток. Менингоэнцефалит возникает в результате инфицирования мозга через тройничные нервы. Предполагается, что у стельных невакцинированных коров вирус распространяется периферическими лейкоцитами к плацентарному барьеру и переносится на плод, что приводит к острой летальной инфекции и прерыванию беременности. Инфекции в последнем триместре беременности могут привести к мумификации, аборту, мертворождению или рождению слабых телят. Телята, инфицированные в утробе матери, часто демонстрируют тяжелый некротический энтерит, гепатит, нефрит и изъязвление верхних отделов пищеварительного тракта. Вирус может получить доступ к репродуктивной системе интраназальным или венерическим путем. Было показано, что естественная респираторная инфекция приводит к выделению BHV-1 в сперму. Также, вирус был выделен из препуциальных смывов через 2–10 дней после экспериментального интраназального или генитального инфицирования быков. Однако, вирус не был обнаружен в проксимальном отделе мочеиспускательного канала, добавочных железах, придатках семенников или семенниках экспериментально инфицированных быков.²² Гистопатологические изменения в неосложненных случаях включают острое катаральное воспаление. Имеет место нейтрофильная инфильтрация слизистой оболочки. В подслизистой оболочке часто обнаруживают лимфоцитарную и плазмоцитарную инфильтрацию с присутствием макрофагов. В течение первых нескольких дней инфекции в эпителиальных клетках могут присутствовать внутриядерные (Cowdry типа A) включения. Абортированные плоды демонстрируют некроз в различных тканях и особенно в печени (очаговый некротический гепатит). Геморрагические поражения и очаги некроза, окруженные лейкоцитами, видны на различных тканях плода (печень, мозг, почки, кора надпочечников и лимфатические узлы). Изредка наблюдаются внутриядерные включения. Вирусный антиген может быть обнаружен в срезах легких, печени, селезенки, почек, надпочечников, плаценты и у мумифицированных плодов с использованием системы авидин-биотин комплекса.

Как клеточный, так и гуморальный иммунный ответ активируются после инфицирования или вакцинации. Однако, титры сывороточных нейтрализующих антител не являются надежным показателем устойчивости или защиты.

Диагностика

Вирус может быть обнаружен путем его изоляции в образцах, собранных во время острой фебрильной фазы инфекции. BHV-1 может быть легко выделен в клеточной культуре из назальных мазков, мазков из конъюнктивы и влагалища, препуциальных смывов, котиледонов плаценты абортированного плода, печени плода, легких, селезенки, почек, лимфатических узлов, слизистой оболочки дыхательных путей, миндалин и легких собранных в вирусную транспортную среду. Первичная клеточная культура (взятая непосредственно от объекта (ex vivo)) более чувствительна.

Гистологически внутриядерные вирусные включения (Cowdry типа A) могут иногда обнаруживаться в эпителиальных клетках тканей влагалищной биопсии, собранных на ранней стадии ИПВ. Эти включения также присутствуют в тканях абортированных плодов. Тем не менее, отсутствие включений не исключает BHV-1, поскольку они обычно являются временными.¹³

Наиболее чувствительным и быстрым методом диагностики является ПЦР, посредством которого выделяют вирусные частицы из назальных мазков, бычьей фетальной сыворотки и образцов спермы.²³ ПЦР в реальном времени обеспечивает высокую специфичность и чувствительность для обнаружения BHV-1 в сперме.^24,25

Серологическое исследование парных образцов сыворотки может обнаружить свежую инфекцию. Для обнаружения антител против инфекции BHV-1 были использованы как тест на нейтрализацию вируса (VNT), так и иммуноферментный анализ (ELISA). ELISA является специфическим, чувствительным и практичным тестом для обнаружения антител и имеет преимущества перед VNT. Выявление скрытой инфекции BHV-1 у крупного рогатого скота имеет важное значение в программах контроля заболевания.

Нейтрализующие антитела, в основном IgM, за которыми следует класс IgG, обычно выявляются через 7 дней после заражения.¹³ Тестирование сборного молока в танках на наличие антител к BHV-1 может быть полезным в программах ликвидации и мониторинга.²⁶

Диагностика BHV-1-ассоциированных абортов основывается на макроскопических и гистопатологических поражениях в тканях плода и плаценты. Диагноз подтверждается детекцией вирусного антигена с помощью теста на флуоресцентные антитела, иммуногистохимии или вирусной ДНК методами ПЦР. Недавнее ретроспективное исследование 19 459 абортов у коров в пяти диагностических лабораториях в Соединенных Штатах показало, что только 35,7% материалов были проверены на BHV-1. Из протестированных образцов 3,8% были положительными как доля от общего числа абортов; диагноз BHV-1 подтверждался редко.²

Профилактика и контроль

Доступно несколько вакцин, включая вакцины с МЖВ, инактивированные вакцины, субъединичные вакцины ( содержат лишь антигенные части патогена) и маркерные вакцины.²⁷ Ни одна из этих вакцин не предотвращала латентность вируса. МЖВвакцину можно вводить парентерально (произведена из культуры почечной ткани плода крупного рогатого скота) или интраназально (произведена из культуры ткани кролика или культуры ткани крс и содержит термочувствительный мутированный BHV-1). Живые вакцинные штаммы можно дифференцировать от полевых штаммов путем расщепления рестрикционными эндонуклеазами (фермент, который расщепляет ДНК на фрагменты) . МЖВ-вакцины индуцируют быстрый иммунный ответ, длительный иммунитет и формируют местный иммунитет слизистых. При интраназальном введении МЖВ BHV-1 выделение вируса во внешнюю среду может временно прерваться на срок до 10 дней после вакцинации.²⁸ Парентеральные вакцины с МЖВ (модифицированным живым вирусом) могут вызывать аборт и не должны использоваться у невакцинированных стельных коров.²⁹ МЖВ-вакцины также могут вызывать латентное заболевание и последующее выделение вакцинного вируса. Интраназальные вакцины безопаснее для стельных коров и высокоэффективны в предотвращении абортов. Они обычно обеспечивают быструю защиту и могут использоваться при вспышке заболевания. Инактивированные вакцины не вызывают иммуносупрессию, аборт или латентность. Однако, они не так эффективны и не предотвращают развитие латентности после воздействия полевого вируса.

Программы вакцинации полезны в профилактике заболеваний, но не распространенности инфекции BHV-1 в стаде. Маркерные вакцины можно использовать в сочетании с соответствующим тестированием для дифференциации между инфицированными и вакцинированными животными. Несколько европейских стран приняли стратегию тестирования стад и убоя положительных животных, чтобы искоренить болезнь. Необходим эффективный мониторинг и меры биобезопасности, чтобы избежать риска повторного введения BHV-1 в свободные от него стада.

Заключение

Хотя ИРТ был определен как важная причина экономических потерь из-за респираторных и половых заболеваний, ликвидировать его непросто из-за вероятности латентного течения и своеобразной адаптации. Основным проявлением остается респираторный синдром и аборт. Однако, иногда могут возникать вспышки ИПВ и ИПБ. Генитальные проявления, по-видимому, чаще фиксируются в Европе. Несколько европейских стран добились успеха в искоренении болезни с помощью программы, объединяющей вакцинацию и тестирование.

Хотя вакцины против BHV-1 доступны на рынке, вакцинация может не обеспечивать полную защиту, или ее эффективность может быть снижена из-за нарушения техники вакцинации и неправильного обращения с вакциной. Кроме того, Национальный обозреватель здоровья животных 2007 года показывает, что только 68,9% стад мясных коров и телят вакцинируют от BHV-1. Следовательно, инфекция BHV-1 остается потенциальным дифференциальным диагнозом для аборта в мясных стадах коров и молодняка. Выделение BHV-5 из спермы и его связь с заболеваниями половых органов заслуживают дальнейшего изучения.

Ссылки

1. Cowley D, Clegg T, Doherty M, More S. Некоторые аспекты инфекции, вызванной герпесвирусом крупного рогатого скота типа -1, в стадах молочного и мясного крупного рогатого скота в Ирландской Республике. Acta Vet Scand 2011;53:40.

2. Gould S, Cooper V, Reichardt N, O’Connor A. Оценка распространённости абортов, вызванных герпесвирусом крупного рогатого скота типа 1, на основании материалов, поступивших на диагностику в пять ветеринарных диагностических лабораторий США. J Vet Diagn Invest 2013;25:243–247.

3. Muylkens B, Thiry J, Kirten P, Schynts F, Thiry E. Инфекция, вызванная герпесвирусом крупного рогатого скота типа 1, и инфекционный ринотрахеит крупного рогатого скота. Vet Res 2007;38:181– 209.

4. Esteves P, Aspilki F, Franco D и др. Герпесвирус крупного рогатого скота типа 5 в сперме быка без клинических признаков заболевания. Vet Rec 2003; 152:658– 659.

5. Gomes L, Rocha M, Souza J, Costa E, Barbosa-Stancioli E. Герпесвирус крупного рогатого скота типа 5 (BoHV-5) в сперме быка: амплификация и анализ последовательности гена US4. Vet Res Commun 2003;27: 495– 504.

6. Kirkland PD, Poynting AJ, Gu X, Davis RJ. Бесплодие и венерическое заболевание у крупного рогатого скота, осеменённого спермой, содержащей герпесвирус крупного рогатого скота типа 5. Vet Rec 2009;165:111–1113.

7. Memeteau S. Состояние нормативного регулирования в отношении I.B.R. в Европе. Le Nouveau Praticien Vétérinaire Élevages et Santé 2011:29–30.

8. Pritchard GC, Banks M, Vernon R. Субклиническая вспышка инфекции, вызванной вирусом инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота, в молочном стаде с высоким уровнем здоровья. Vet Rec 2003;153:113–117.

9. Edwards S, Newman R, White H. Вирулентность британских изолятов герпесвируса крупного рогатого скота 1 в зависимости от генотипа вируса. Br Vet J 1991;147:216–231.

10. Givens MD. Биобезопасность при использовании быков: диагностика возбудителей, вызывающих бесплодие у быков или передающихся через сперму. Clin Theriogenol 2012;4:302–307.

11. Pozzi N, Guérin B. Искоренение инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота и управление связанными с ним рисками для здоровья при искусственном осеменении крупного рогатого скота. Le Nouveau Praticien Vétérinaire Élevages et Santé 2011:39–43.

12. Wrathall A, Simmons H, Soom A. Оценка риска передачи вирусов реципиентам эмбрионов крупного рогатого скота при оплодотворении спермой, инфицированной вирусами. Theriogenology 2006;65:247–274.

13. Turin L, Russo S. Инфекция BHV-1 у крупного рогатого скота: современные данные. Vet Bull 2003;73:15R–21R.

14. Oirschot J. Герпесвирус крупного рогатого скота 1 в сперме быков и риск его передачи: краткий обзор. Vet Quart 1995;17:29–33.

15. Miller J, Maaten M. Поражения половых путей у тёлок после внутриматочного введения вируса инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота. Am J Vet Res 1984;45:790–794.

16. Schynts F, Meurens F, Detry B, Vanderplasschen A, Thiry E. Возникновение и сохранение рекомбинантов герпесвируса крупного рогатого скота 1 после первичной инфекции и реактивации из латентного состояния. J Virol 2003;77: 12535–12542.

17. Ackermann M, Wyler R. ДНК штамма IPV герпесвируса крупного рогатого скота 1 в крестцовых ганглиях в период латентной инфекции после интравагинального заражения. Vet Microbiol 1984;9:53–63.

18. Jones C. Латентная инфекция, вызываемая вирусом простого герпеса типа 1 и герпесвирусом крупного рогатого скота 1. Clin Microbiol Rev 2003;16:79–95.

19. Jones C, Chowdhury S. Обзор биологии герпесвируса крупного рогатого скота типа 1 (BHV-1), его роли как сопутствующего фактора в комплексе респираторных заболеваний крупного рогатого скота и разработки усовершенствованных вакцин. Anim Health Res 2007;8:187–205.

20. Tikoo S, Campos M, Babiuk L. Герпесвирус крупного рогатого скота 1 (BHV-1): биология, патогенез и меры борьбы. Adv Virus Res 1995;45: 191–223.

21. Miller J, Maaten M. Экспериментально вызванная инфекция вирусом инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота на ранних сроках беременности: влияние на жёлтое тело и зародыш. Am J Vet Res 1986; 47:223–228.

22. Engels M, Ackermann M. Патогенез герпесвирусных инфекций жвачных животных. Vet Microbiol 1996;53:3–15.

23. De-Giuli L, Magnino S, Vigo PG, Labalestra I, Fabbi M. Разработка метода диагностики инфекций, вызываемых герпесвирусом крупного рогатого скота 1, герпесвирусом крупного рогатого скота 2 и герпесвирусом крупного рогатого скота 4, на основе полимеразной цепной реакции и типирования с помощью рестриктаз. J Vet Diagn Invest 2002;14:353–356.

24. Wang J, O’Keefe J, Orr D и др. Международное межлабораторное сравнительное испытание метода ПЦР в реальном времени для выявления герпесвируса крупного рогатого скота 1 в разбавленной сперме быков. Vet Microbiol 2008;126:11–19.

25. Wang J, O’Keefe J, Orr D и др. Валидация метода ПЦР в реальном времени для выявления герпесвируса крупного рогатого скота 1 в сперме быков. J Virol Methods 2007;144:103–108.

26. Yan B, Chao Y, Chen Z и др. Серологическое исследование распространённости инфекции, вызванной герпесвирусом крупного рогатого скота типа 1, в Китае. Vet Microbiol 2008;127:136–141.

27. Fulton R, d’Offay J, Eberle R. Герпесвирус крупного рогатого скота -1: сравнение и дифференциация вакцинных и полевых штаммов на основе различий в геномных последовательностях. Vaccine 2013;31:1471–1419.

28. Baker J, Rust S, Walker R. Передача вакцинного штамма вируса инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота от бычков, вакцинированных интраназально, невакцинированным бычкам при совместном содержании. Am J Vet Res 1989;50:814–816.

29. Kennedy P, Richards W. Патоморфология абортов, вызванных вирусом инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота. Pathol Vet 1964;1:7–17.