(a)
(b)
В начале своей карьеры я вёл записи о 200 повторных промываниях. Коров промывали повторно всякий раз, когда эмбрионы обнаруживались в последних четырёх чашках. Каков был результат? Дважды я находил по одному эмбриону, а один раз — 13. При остальных 197 повторных промываниях эмбрионов не обнаружилось. Повторное промывание, давшее 13, помогло мне усвоить важный урок. Донором была нерожавшая тёлка породы кианина в возрасте 12 месяцев, массой 450 kg, с небольшими половыми органами. При первом промывании я не нашёл эмбрионов в чашках 1–8, но обнаружил 13 в чашках 9–12.
Я понял, что матку нерожавшей тёлки, которая ещё ни разу не растягивалась при беременности, нужно сильнее наполнять жидкостью и массировать, чтобы жидкость достигла дистального отдела рога возле маточно-трубного соединения (UTJ), где на 7-й день находятся эмбрионы. При этом необходимо соблюдать осторожность, чтобы не перерастянуть матку нерожавшей тёлки и не вызвать кровотечение или разрыв. Тем не менее её нужно наполнить до плотного расправления, а верхушки рогов — массировать, направляя жидкость в эту область.
Я советую всем начинающим специалистам найти способ оценивать свою технику сбора эмбрионов, чтобы быть уверенными, что все эмбрионы извлекаются эффективно. Сбор жидкости в ёмкости с последующим пропусканием через несколько фильтров обойдётся дороже, но будет быстрее моего метода, которым я пользовался до появления фильтров.
Промывание отдельных рогов матки
При промывании отдельных рогов требуется меньше промывочной среды, но для меня главная ценность этого метода — возможность промыть матку для извлечения одного эмбриона или проверить подозрение на непроходимость яйцевода. Например, если у коровы на каждом яичнике по шесть жёлтых тел, а при промывании тела матки получено только шесть эмбрионов, невозможно узнать, из какого рога они вышли. При промывании рогов по отдельности, если жидкость из каждого рога исследовать отдельно, можно диагностировать непроходимость яйцевода.
На мой взгляд, в опытных руках промывание отдельных рогов выполняется быстро и безопасно, но для начинающего специалиста здесь больше возможностей допустить ошибку. Залог успешного промывания — каждый раз правильно устанавливать манжету в роге. Если баллон раздуть слишком сильно, эндометрий разорвётся, и промывочная среда с эмбрионами может попасть в широкую связку матки. При этом в стенке матки и широкой связке возникает крепитация, напоминающая на ощупь ткань, поражённую эмфизематозным карбункулом. Кроме того, возникнет сильное кровотечение. Чтобы всё же завершить промывание, выпустите воздух из манжеты, вновь вставьте стилет и продвиньте катетер за место разрыва, затем снова раздуйте манжету и продолжайте промывание.
Если манжета раздута недостаточно, катетер сместится каудально и в конце концов окажется у шейки матки. В таком случае можно вновь вставить стилет и установить катетер в роге либо уменьшить наполнение манжеты настолько, чтобы жидкость свободно проходила из одного рога в другой, и перейти к промыванию тела матки. Если манжета правильно расположена на половине или двух третях длины рога, для её раздувания требуется 8–15 mL. Расширение манжеты следует контролировать пальцами и прекращать раздувание, когда надёжно установленная манжета слегка выпячивает стенку рога. На ощупь она должна быть немного уплощённой и вытянутой, а не оставаться круглой (рисунок 76.11).
При правильном расположении манжета должна находиться как можно дальше в роге. Для каждого промывания потребуется совсем немного жидкости. Обычно я ввожу среду в верхушку каждого рога пять-шесть раз, меняя объём так, чтобы добиться лёгкого расширения рога. После каждого введения, прежде чем собрать жидкость, нужно помассировать верхушку рога возле маточно-трубного соединения (UTJ). Большая часть жидкости вытечет под действием силы тяжести; чтобы удалить остатки среды, потребуются лишь небольшие манипуляции. Обычно я начинаю с введений по 15–mL, увеличивая объём до 30–50 mL, если рог достаточно велик. Закончив промывание одного рога, извлекают катетер, снова вставляют стилет, а затем устанавливают катетер в противоположном роге. Опытные специалисты могут повторно ввести стилет, пока катетер ещё находится в матке, но поначалу лучше этого не делать.
Многие специалисты вводят среду самотёком, но я предпочитаю пользоваться шприцами: так я каждый раз знаю введённый объём и могу стандартизировать процедуру. При введении жидкости самотёком всё равно необходимо после каждого введения массировать верхушку рога, иначе часть эмбрионов останется в матке. При сборе эмбрионов у нерожавших тёлок обязательно нужно энергично направлять жидкость массажными движениями в область маточно-трубного соединения (UTJ). Некоторые специалисты вводят жидкость с помощью насосов, но мне по-прежнему хорошо служит простой способ.
Фильтрация и поиск эмбрионов
Когда жидкость окажется в фильтре EZ Flow, его наклоняют, чтобы остатки промывочной жидкости вытекли через сетку. Таким образом, все эмбрионы должны остаться на сетке фильтра с ячейками 75 мкм
(a)
(b)
Недостаточное раздувание:
баллон остаётся круглым
Правильное раздувание:
манжета уплощена, стенка рога расширена
Рисунок 76.11 Правильное положение и степень раздувания баллона при промывании отдельного рога.
на боковой стенке EZ Flow. Я наполняю шприц объёмом 20–mL свежей промывочной средой, присоединяю иглу калибра 22 длиной 2.5–cm и струёй смываю содержимое с сетки фильтра. Смыв собирается на дне чашки EZ Flow, которую затем используют для поиска эмбрионов. Я предпочитаю промывать сетку дважды, каждый раз используя 20 mL.
«Фальшивые деньги»
Теперь немного поговорим об аномалиях и о случаях, когда промывание проходит не так гладко. Причиной могут быть генетические аномалии, повреждения, нанесённые специалистом по искусственному осеменению, или травмы, возникшие при самом промывании.
Встречающиеся генетические аномалии
При обнаружении таких генетических аномалий следует уведомлять племенные ассоциации, чтобы можно было выявлять линии — носители этих признаков. Однако, по моему опыту,
Эмбриональный
рудимент
—
маточного
рога
Рисунок 76.12 Uterus unicornis (сегментарная аплазия рога матки).
большинство племенных ассоциаций не желают «вредить» заводчику, называя одно из его животных возможным носителем.
Однорогая матка
Да, как ни странно, некоторые доноры поступают на промывание, имея только один рог матки. Промывать их легко, потому что имеется лишь один прямой рог. Хотя обычно я обнаруживал у таких животных два яичника, мне удавалось получить лишь половину того количества эмбрионов, которого можно было ожидать по числу жёлтых тел на яичниках. Это означает, что один яичник соединён только с рудиментом отсутствующего рога, а другой — с существующим рогом (рисунок 76.12).
Аномалии шейки матки
Со временем вам встретятся все три эти аномалии шейки матки. Если не знать об их существовании, неудачные попытки провести катетер будут вызывать досаду.
Y-образная шейка матки
У Y-образной шейки матки одно отверстие во влагалище, а примерно посередине шейка раздваивается. Иногда имеется общее тело матки, но чаще каждый канал шейки ведёт только в один рог, не сообщающийся с другим через общее тело матки. Это означает, что при искусственном осеменении и сборе эмбрионов с каждым рогом необходимо работать отдельно. Обычно один из каналов шейки шире, и, если аномалия не выявлена, осеменение всегда будет проводиться в один и тот же рог. Внимательный специалист распознает аномальную шейку по отсутствию общего тела матки. Это особенно заметно у реципиентов с Y-образной шейкой. Неспециалисты нередко искусственно осеменяют коров с такой аномалией и даже собирают у них эмбрионы, не понимая, в чём дело (рисунок 76.13).
Перевёрнутая Y-образная шейка матки
У перевёрнутой Y-образной шейки матки два отверстия во влагалище, но оба канала сходятся в средней части шейки и ведут в одно общее тело матки. Таких коров можно искусственно осеменять и промывать им матку. Недостаточно внимательный специалист может даже не распознать аномалию, а просто посчитать, что через шейку трудно провести катетер. Диагностика в этом случае не столь важна, поскольку рога имеют общее тело матки: независимо от того, какое влагалищное отверстие используется, все яйцеклетки должны оплодотворяться, а эмбрионы — извлекаться (рисунок 76.14).
Двуствольная шейка матки
При этой аномалии во влагалище имеются два отверстия и две полностью раздельные шейки матки, каждая из которых ведёт в свой рог. Такую аномалию легче выявить при пальпации. Шейка заметно
шире обычной. При глубокой пальпации можно прощупать бороздку, напоминающую промежуток между стволами двуствольного ружья. Через каждый «ствол» необходимо проводить искусственное осеменение отдельно, а из каждого рога отдельно собирать эмбрионы, поскольку общего тела матки нет (рисунок 76.15).
Повреждения, причинённые техником по искусственному осеменению
Утолщённая стенка прямой кишки
Если при пальпации донора перед сбором эмбрионов через 7 дней после искусственного осеменения вы ощущаете утолщённую, отёчную стенку прямой кишки, это явный признак того, что у техника возникли трудности при осеменении. Иногда прямая кишка травмирована настолько сильно, что безопасно собрать эмбрионы у коровы невозможно. Если сбор всё же проводится, нередко обнаруживаются неоплодотворённые яйцеклетки, что указывает на то, что сперма так и не была введена в матку.
Бурые сгустки крови
Бурые сгустки крови в первой порции извлечённой жидкости обычно указывают на то, что инструмент для искусственного осеменения травмировал тело матки и вызвал кровотечение — от слабого до сильного. Бурый цвет означает, что кровь пролилась несколько дней назад, скорее всего при осеменении. Это ещё один тревожный признак того, что эмбрионы могут оказаться неоплодотворёнными. Бурые сгустки крови — враги специалиста.
Введённая жидкость исчезает и не извлекается
На ум приходят три причины. Во-первых, инструмент для искусственного осеменения мог вызвать перфорацию, которая ещё не зажила. Во-вторых, вы сами могли перфорировать стенку. При прежней травме обычно обнаруживаются
