бурые сгустки крови, тогда как при свежей травме кровь всегда красная. В обоих случаях процедуру промывания можно спасти, если удастся найти место перфорации: достаточно провести катетер дальше отверстия, раздуть баллон и промыть рога по отдельности.
Третья причина серьёзна и почти всегда приводит к потере всех эмбрионов. Когда имеется много неовулировавших фолликулов, наполненных активно вырабатывающимся эстрогеном, сфинктер в области маточно-трубного соединения (UTJ) примерно на 5-й день не закрывается должным образом. При введении жидкости в матку на 7-й день она просто проходит через UTJ в яйцевод и вытекает в брюшную полость, унося с собой все эмбрионы. Такая недостаточность сфинктера встречается нечасто, но мне приходилось неоднократно с ней сталкиваться. В некоторых случаях при первых промываниях с введением 25 mL в каждый рог утечки не было, но она возникала, когда я увеличивал объём до 50 или 75 mL на каждый рог. Поэтому при первых двух введениях следует использовать меньший объём жидкости, а при последующих увеличивать его. Утешает то, что из-за повышенного уровня эстрогена эти эмбрионы обычно и так не были оплодотворены.
Образования на наружной поверхности матки
Образование размером от стеклянного шарика до мяча для гольфа вблизи тела матки указывает на вероятную травму, вызванную инструментом для искусственного осеменения или грубой пальпацией, с образованием гематомы. Со временем такие образования рассасываются, но, если они очень велики, в день промывания возникают затруднения.
Гематомы тазовой области
Гематомы тазовой области, возникшие вследствие травмы при неправильной установке CIDR, могут помешать доступу к матке. Обычно они расположены с одной стороны, на 3 часов или на 9 часов по условному циферблату, и выступают в полость таза. Назначьте
антибиотики системного действия на 1 неделю для предотвращения образования абсцесса. Если абсцесс всё же образуется, дренируйте его через прокол со стороны влагалища.
Повреждения, причинённые специалистом по пересадке эмбрионов
Крепитация в широкой связке матки указывает на разрыв эндометрия, из-за которого промывочная среда просочилась в связку. Ощущение напоминает газовую крепитацию в поражённых мышцах при эмфизематозном карбункуле. Если вы столкнулись с этим, прекратите промывание, введите пенициллин в матку и назначьте пенициллин системного действия на 5 дней. Эмбрионы будут потеряны, попав в связку. Частая причина — смещение манжеты назад при промывании рогов либо чрезмерное раздувание манжеты при промывании рога или тела матки. Это ощущение невозможно забыть. Крепитация — враг специалиста.
Во время промывания возле тела матки, особенно в области раздвоения, или вдоль серозной оболочки рога могут внезапно появиться гематомы, если обращаться с маткой слишком грубо. При пальпации всегда надавливайте плоской поверхностью пальцев и по возможности избегайте давления кончиками пальцев.
Другие проблемные области
Травматические спайки
Причины их образования разнообразны. Кесарево сечение или осложнённые роды, приведшие к перфорации, могут вызвать выраженные спайки, из-за которых манипуляции с маткой становятся затруднительными или невозможными. Паутинообразные спайки вокруг яичника, вероятно, связаны с перенесённой восходящей инфекцией матки или сальпингитом. Это серьёзная проблема с неблагоприятным прогнозом. Такие паутинообразные спайки часто затрагивают яичниковую сумку и мешают захвату яйцеклетки во время овуляции. Лучший способ лечения с расчётом на долгосрочный результат — попытаться добиться стельности коровы путём пересадки эмбриона в надежде, что растяжение матки устранит достаточно спаек для прохождения сперматозоидов и яйцеклеток через яйцевод. В качестве альтернативы in vitro можно попробовать оплодотворение (IVF).
Иногда при проведении катетера можно ощутить, что серозная оболочка матки стала зернистой, словно наждачная бумага. Происхождение этого изменения неизвестно, но на ощупь оно весьма характерно. Я подозреваю, что травма, нанесённая «крылышками» CIDR, может вызывать воспаление в тазовой области с отложением фибрина на серозной оболочке. В большинстве случаев помогает неоднократное введение пенициллина местно и назначение пенициллина системного действия (100 mL ежедневно в течение 7 дней).
Параовариальные кисты
Небольшие узелки вокруг яичниковой сумки обычно не вызывают патологии, если только не достигают очень крупных размеров. Большинство из них меньше 10 cm.
Предотвращение нежелательной или многоплодной стельности
После промывания всем донорам следует вводить простагландин. Обычно в конце промывания я ввожу в матку 5 mL препарата Lutalyse, а затем прошу владельца ввести 5 mL (25 mg) внутримышечно дважды в течение третьего дня после промывания. Это быстро уменьшает размеры яичников и прерывает нежелательную стельность. Если сбор эмбрионов у коров проводят с интервалом 21–28 дней, очень важно быстро уменьшить размеры яичников. Однако
введение PGF2α в матку до проверки чашек на наличие эмбрионов лишает вас возможности при необходимости повторно промыть матку донора. Двукратного внутримышечного введения на 10-й день (через 3 дня после промывания) будет достаточно для предотвращения стельности, если можно положиться на то, что владелец не забудет сделать инъекции.
Полезные советы
Проба с покачиванием
Даже когда катетер проходит через шейку матки нормально, иногда он закупоривается. После введения первой порции жидкости и до начала массажа концов рогов матки можно с помощью простого теста убедиться, что просвет катетера проходим. Пока жидкость находится в матке, до открытия выпускного зажима и пальпации концов рогов осторожно сожмите область раздвоения два-три раза. При каждом сжатии вы должны увидеть, как пузырьки воздуха проходят из катетера обратно в прозрачную трубку: это свидетельствует о проходимости. Если жидкость или пузырьки не движутся в каудальном направлении, значит, есть проблема с оттоком. Если её не удаётся устранить массажем кончика катетера, изменением степени раздувания манжеты или перемещением манжеты в теле матки, сейчас самое подходящее и безопасное время, чтобы извлечь катетер и ввести новый. Если вы ещё не массировали концы рогов матки, потеря эмбрионов крайне маловероятна.
Метод вымывания слизи
Когда провести катетер через шейку матки трудно, его боковые отверстия возле кончика нередко забиваются шеечной слизью. Избыток слизи в чашке для промывочной жидкости — враг специалиста. Слизь можно легко удалить вымыванием до того, как жидкость попадёт в рога матки. Раздув манжету катетера в теле матки, обхватите большим и указательным пальцами оба рога непосредственно перед телом матки (рисунок 76.16). Быстро введите через катетер 15–20 mL среды и сразу откройте выпускную трубку, дав жидкости стечь на пол. Повторите это два-три раза, пока в жидкости, вытекающей из выпускной трубки, не перестанет быть слизи. Помните: оба рога нужно держать пережатыми, чтобы жидкость поступала только в тело матки и вытекала только из него. Отсоедините трубку от катетера и тщательно промойте её, прежде чем снова присоединять к катетеру и чашке для сбора промывочной жидкости.
Сбор эмбрионов на открытом воздухе в холодную погоду
Чтобы среда не остывала, мы используем два пластиковых выдвижных ящика, которые можно поставить друг на друга (из Wal-Mart). На дне каждого лежит небольшой электрический коврик с подогревом. В верхнем ящике на коврике лежит пакет со средой. В нижнем ящике чашка с фильтром стоит на переднем краю коврика; там сделано отверстие, через которое жидкость из фильтровальной чашки стекает на пол.
Чтобы защитить трубку, идущую от коровы к чашке, мы используем отрезок вспененной теплоизоляции для водопроводных труб длиной 120–cm, разрезанный вдоль по всей длине. Мы помещаем трубку внутрь этого отрезка, чтобы жидкость во время промывания оставалась относительно тёплой. При сильном холоде внутри изоляции можно также проложить электрический нагревательный кабель.
Заключительные замечания о сборе эмбрионов
Сбор эмбрионов — сложная и увлекательная процедура для специалистов. Постоянно появляются новые идеи относительно методик, инструментов и материалов, которые затем испытываются на практике. Надеюсь, вы выработаете надёжную методику, в которой будете уверены, научитесь успешно работать со всеми нормально устроенными матками и достаточно хорошо ориентироваться во всех случаях сбора эмбрионов при аномальном строении матки. Даже спустя 35 лет меня по-прежнему удивляет, что всё это действительно работает и что мы можем с таким удовольствием зарабатывать на жизнь, помогая своим клиентам содействовать генетическому прогрессу в скотоводстве.
Теперь вы готовы передать чашку для поиска эмбрионов под микроскопом, их оценки и подготовки к пересадке в свежем виде или замораживанию. Поскольку эти вопросы рассматриваются в других главах, перейдём к методике нехирургической пересадки свежих и замороженных эмбрионов.
Пересадка эмбриона
Нехирургическая пересадка эмбрионов прекрасно иллюстрирует старую поговорку: «Цепь не прочнее своего самого слабого звена». Успех зависит от многих факторов, на некоторые из которых вы как специалист повлиять не можете. Сейчас я гораздо лучше, чем раньше, понимаю, насколько многочисленные внешние воздействия влияют на моих
потенциальных реципиентов. Возможно, в этом обсуждении вы найдёте для себя пару полезных идей.
Дефицит минеральных веществ
В каждом регионе США существуют свои потребности в дополнительном введении минеральных веществ. Вам следует знать потребности своего региона.
Отбор животных в группу потенциальных реципиентов
Я часто говорю: «По внешнему виду коровы можно судить о состоянии её внутренних органов». Коровы с неудовлетворительной упитанностью, тусклой шерстью, которых содержат в грязных загонах, обычно не лучший выбор. Итак, при отборе мы обращаем внимание на следующее. ( Примечание редактора : Отбор реципиентов и управление стадом подробно рассматриваются в главе 78. Ниже дан обзор аспектов, которые автор считает решающими для общего успеха программы трансплантации эмбрионов.)
Размер
Трудные роды — наш враг. Мёртвые телята никого не впечатляют, особенно нашего банкира. При включении коров в группу реципиентов учитывайте ожидаемую массу телёнка при рождении в зависимости от породы эмбриона. Если используются тёлки, я в основном выбираю только помесей молочных пород или крупных тёлок мясных пород массой не менее 360 kg на момент начала синхронизации (вообще-то я предпочитаю тёлок массой 385–408 kg).
Молочная продуктивность
Здоровое вымя — наш союзник. Получить живого телёнка — лишь выиграть первую схватку. Реципиент должна давать достаточно молока, чтобы вырастить отличного телёнка. При пересадке эмбрионов молочных пород это неважно, поскольку телят будут выпаивать из бутылки.
Предшествующая история
По возможности очень полезно знать, что реципиент регулярно телилась и каждый год рано приходила в охоту. Однако часто такие сведения недоступны.
Темперамент
Неуправляемые реципиенты мне ни к чему. С каждой приходится часто работать, поэтому спокойный нрав — важное подспорье. Он также передаётся телёнку, который должен представлять гораздо большую ценность, чем его мать.
Минимальный стресс
Стрессовые факторы необходимо устранять. Нужны подходящие укрытия от зимнего холода и от жары в остальные месяцы. Загоны, раскисшие от грязи, — враги. Травянистые пастбища — друзья. Свежая вода — друг. Застоявшаяся вода в прудах или поилках — враг. Для успеха необходимо отличное качество кормовых трав.
Биобезопасность
Несколько заболеваний могут сорвать программу трансплантации эмбрионов; они подробно рассматриваются в главе 80. Проверяйте всех реципиентов и исключайте из стада животных с положительным результатом анализа на следующие заболевания.
Вирус вирусной диареи крупного рогатого скота
Животные с персистентной инфекцией вирусом вирусной диареи крупного рогатого скота (BVDV) появляются, когда стельная корова подвергается воздействию BVDV между 30 и 150 днями стельности. Если такие животные рождаются живыми, они выделяют жизнеспособный BVDV с рождения до смерти. Большинство погибает к возрасту 1 года, но сообщения о животных, проживших до 7 лет, подчёркивают необходимость их выявления и удаления из стада. У всех животных моложе 6 месяцев берите образец ткани из ушной раковины, а у остальных исследуйте сыворотку методом ИФА или также берите образец ткани из ушной раковины.
Лактация
Лактирующие коровы в хорошей упитанности обычно становятся отличными реципиентами. Как правило, коров можно использовать через 45–50 дней после отёла если они находятся в хорошем состоянии. Сухостойные коровы — отличные реципиенты, если их намеренно оставили нестельными. Но если у них были проблемы с осеменением, они уже отлучили телёнка или их запустили, лучше их не использовать.
Оценка упитанности
Оптимальная для плодовитости оценка упитанности (BCS) составляет 4–6 по шкале из 1–9 баллов. Если у мясного крупного рогатого скота с BCS 3 заметно выступают рёбра и позвоночник, такие коровы, как правило, находятся на грани прекращения половой цикличности. Если цикл у них вообще сохраняется, жёлтые тела обычно меньше и плотнее. Результаты использования таких коров обычно разочаровывают. Чрезмерно упитанные коровы и тёлки приобрели дурную репутацию из-за представления о том, что «жирные коровы бесплодны». Однако мой опыт показывает, что если корова растолстела потому, что её намеренно оставили нестельной или перекармливали, её плодовитость всё же будет вполне приемлемой. Но если реципиент уже пересадили два эмбриона или провели несколько безуспешных попыток искусственного осеменения (не более трёх), её следует пустить к быку или выбраковать.
Neospora canis
Это заболевание, связанное с псовыми, вызывает аборты у заражённых коров и, как предполагается, встречается главным образом к западу от реки Миссисипи. За последние 8 лет мы обследовали более 8000 реципиентов мясных пород и помесей мясных и молочных пород в Теннесси, Кентукки и Алабаме и обнаружили заражение у 9% из них. Neospora -положительные коровы заражают 100% своих телят внутриутробно . Бычки заражаются, но не страдают от болезни и не могут её передавать. У самок возможен аборт; если же его не происходит, они заражают каждую рождённую ими тёлочку. Коровы заражаются Neospora при поедании сена, силоса или корма, загрязнённых фекалиями псовых, содержащими ооцисты Neospora (собак или койотов). Neospora -положительных доноров можно безопасно подвергать вымыванию эмбрионов, пересаживая полученные эмбрионы отрицательным реципиентам. Используйте доступные серологические анализы на Neospora .
Болезнь Йоне
Исследование сыворотки ненадёжно, но подходит для предварительного скрининга. Лучше всего бактериологическое исследование кала, однако оно требует много времени. Тестирование и удаление животных с положительным результатом должны поддерживать низкую распространённость инфекции в стаде. Заражённые коровы передают болезнь Йоне внутриутробно 26%
