случаев. Большинство остальных случаев заражения происходит через рот, когда новорождённый телёнок сосёт соски коровы.
Лейкоз крупного рогатого скота
Некоторым молочным хозяйствам удалось получить стада, свободные от вируса лейкоза крупного рогатого скота (BLV), благодаря выбраковке животных, разделению стад и использованию молозива от коров, свободных от BLV. При нынешнем уровне заражённости в Соединённых Штатах сделать это очень трудно. Лучшая профилактическая мера — тестировать коров и выделять животных с положительным результатом в отдельное стадо либо, если возможно, продавать их. Вирус передаётся с кровью при использовании одних и тех же игл, одной и той же перчатки-рукава для ректального исследования всех коров, а также через крупных кровососущих насекомых. Для профилактики используют новую иглу для каждой коровы, меняют перчатку-рукав после каждого животного и дают молозиво от коров с отрицательными результатами анализов.
Вакцинация
Всех реципиентов следует вакцинировать против BVDV, вируса инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота (IBR), вируса парагриппа 3, респираторно-синцитиального вируса крупного рогатого скота и лептоспироза. По моему мнению, инактивированные вирусные вакцины безопаснее, но менее эффективны. Для нестельных животных лучше всего подходят вакцины на основе модифицированного живого вируса (MLV), обеспечивающие защиту плода от BVDV. Если используется вакцина MLV против IBR, плодовитость реципиентов в течение 30 дней будет снижена: вирус IBR поражает жёлтое тело, что приводит к снижению уровня прогестерона. Соблюдайте осторожность. К стандартной пятивалентной вакцине против лептоспироза необходимо добавить вакцину, содержащую Leptospira borgpetersonii (серовар Hardjo). Этот вариант вызывает не только аборты, но и бесплодие, а также раннюю гибель эмбрионов. Он стал серьёзной проблемой на большей части территории Соединённых Штатов. При необходимости применяйте и другие вакцины с учётом условий вашего региона.
Синхронизация реципиентов
Синхронизация охоты рассматривается в главе 33. Используйте способ, который лучше всего подходит для вашего хозяйства. Опыт и данные показали нам, что естественная охота не обеспечивает более высокую плодовитость, чем индуцированная. Сегодня многие специалисты применяют протоколы трансплантации эмбрионов в фиксированное время, при которых выявлять охоту не требуется. Этот метод предпочтителен для хозяйств со средним уровнем организации работы и неудовлетворительным выявлением охоты. Если хозяйство хорошо организовано и располагает отлично обученными сотрудниками, умеющими выявлять охоту, я предпочитаю ориентироваться на наблюдаемую охоту. При работе с очень ценными эмбрионами такой подход надёжнее.
Трансплантация эмбрионов в фиксированное время даёт немного меньшую долю стельных животных, но позволяет получить больше стельностей в группе реципиентов. Например, если в группе синхронизированы 100 реципиентов и охоту выявляют и регистрируют, примерно у 85 из них она будет замечена в допустимый период, или временное «окно». В среднем у 75 из этих 85 будут хорошие жёлтые тела, и им пересадят эмбрион. Если трансплантацию в фиксированное время применить к 100 реципиентам, примерно у 92 из них будут жёлтые тела, то есть будет пересажено 92 эмбрионов. При доле стельных животных 60% в группе с наблюдаемой охотой и 55% в группе с трансплантацией в фиксированное время общее число стельностей составит соответственно 45 и 50.6 (причём во втором случае труд на выявление охоты не затрачивается).
Допустимая степень синхронности реципиентов
Обычно мы используем реципиентов, у которых охота наступила в пределах от 24 часов до охоты у донора (охота на 8-й день) до 48 часов после неё (охота на 5-й день). Разумеется, реципиенты 7-го дня всегда предпочтительнее. Необходимо учитывать несколько обстоятельств.
-
Свежие эмбрионы переносят большую асинхронность, чем замороженные. Для замороженных эмбрионов я предпочитаю реципиентов от дня 7 (полная синхронность) до дня 5.5 (36 часов после донора), тогда как для свежих эмбрионов подходят реципиенты 5–8-го дня.
-
Если в определённый день получено больше эмбрионов, чем имеется реципиентов, эмбрионы класса 2 и класса 3 обычно пересаживают свежими, а эмбрионы класса 1 замораживают (см. оценку эмбрионов в главе 79).
-
Замороженные эмбрионы подверглись стрессу, поэтому нуждаются в более точной синхронизации. Я редко использую реципиента 8-го дня, но без колебаний использую реципиента 5.5-го дня для замороженных эмбрионов.
-
• Сегодня широко доступны эмбрионы, полученные методом IVF, как свежие, так и замороженные. Для эмбрионов IVF мы применяем те же критерии синхронности, что и для замороженных эмбрионов.
Подготовка реципиента
И вот наконец мы заводим первого реципиента в станок. К реципиентам применим тот же принцип кормления, что и к донорам: наполненный рубец — наш друг, пустой — враг. Никогда не лишайте животных корма: при наполненном животе проводить трансплантацию гораздо легче.
Когда реципиент входит в станок, я эпидурально ввожу 3–5 mL лидокаина и быстро провожу пальпацию, чтобы убедиться в наличии хорошего жёлтого тела. Если жёлтое тело хорошее, а состояние матки при пальпации приемлемо, я заряжаю соломинку с эмбрионом в инструмент IMV для трансплантации эмбрионов размером 52–cm с синим чехлом и сразу же пересаживаю эмбрион. Каждой реципиенту я обязательно устанавливаю идентификационную ушную бирку с указанием родительской пары и предполагаемой даты отёла.
Всегда возникает вопрос, допустимо ли перегонять или перевозить реципиентов к месту трансплантации и обратно. Единственное, что вызывает у меня сомнения, — очень жаркая или очень холодная погода. Перевозка на небольшое расстояние не должна влиять на долю стельных животных.
Место введения эмбриона
Эмбрионы следует вводить в рог матки со стороны жёлтого тела как можно глубже, но не травмируя ткани (рисунок 76.17). Простагландин — наш враг; он присутствует в клетках эндометрия. Если, продвигая инструмент для трансплантации эмбрионов по рогу матки, мы повреждаем ткани, из каждой повреждённой клетки «вытекает» PGF2α. Чтобы плавно направлять инструмент, не задевая и не «ударяя» стенку матки, нужно осторожно надавливать на него плоско расположенными пальцами. Для этого необходимы следующие условия.
Фиксация реципиента
Некоторые животные стоят спокойнее, когда их голова не зафиксирована в головном фиксаторе, тогда как других необходимо зафиксировать и зажать. Очень досадно, когда эмбрион уже почти доставлен к месту введения, а реципиентка внезапно начинает неистово вырываться или пугается
(a)
(b)
Место введения
Жёлтое тело
Рисунок 76.17 Место введения эмбриона. CL — жёлтое тело.
человека, подошедшего к её голове, или чьего-то крика. При пересадке большинства эмбрионов я фиксирую голову животного в станке или стойле, но мне также удобно работать, когда за бёдрами животного установлена низкая перекладина, а голова не зафиксирована, если только животное не слишком буйное.
Опора для ног
Устойчивая опора для ног — один из главных факторов, определяющих готовность животного стоять спокойно. На металлическом или скользком бетонном полу животные паникуют и пытаются вырваться. Хороший слой подстилки в станке очень помогает.
Климатические условия
Работа с перегревшимися животными даёт плохие результаты. Нужно приложить все усилия, чтобы не проводить процедуру в жаркое время дня, либо обеспечить работу вентиляторов и хорошую циркуляцию воздуха. Животным должно быть доступно достаточно воды. В жару следует свести перегон скота к минимуму. Низкие температуры обычно не представляют проблемы, если только холод не становится экстремальным или не сопровождается сыростью и грязью, когда животным негде лечь на сухое место. Комфорт реципиентки способствует успеху.
Введение эмбриона: бережно и быстро
По мере накопления опыта ваша техника работы внутри коровы будет совершенствоваться. Главное правило — действовать бережно и быстро. Данные показывают, что время прохождения через шейку матки мало влияет на частоту наступления беременности, но увеличение времени продвижения по рогу матки обычно снижает вероятность успеха. Чтобы объяснить, как действовать бережно и быстро, я опишу применяемые мной приёмы манипуляции с маткой. Помните, что внутри коровы я работаю левой рукой, поэтому, если вы вводите правую руку, выполняйте описанные действия зеркально. Вот последовательность действий, которой я придерживаюсь после эпидуральной анестезии реципиентки и проверки наличия жёлтого тела.
После эпидуральной анестезии, прежде чем ввести руку в прямую кишку, я ввожу катетер для пересадки эмбрионов во влагалище и продвигаю его почти до шейки матки. Затем я проталкиваю катетер сквозь тонкую пластиковую защитную оболочку, надетую поверх синего чехла. После этого ввожу руку в прямую кишку, нахожу шейку матки и вытягиваю её вперёд, расправляя складки влагалища, которые могут мешать продвижению катетера. Затем провожу катетер для пересадки эмбрионов до четвёртой кольцевой складки шейки матки и удерживаю его там. Если жёлтое тело находится справа, прежде чем провести катетер в тело матки, я оттягиваю шейку матки назад, затем продвигаю руку вперёд и подтягиваю конец правого рога матки вверх и назад (я представляю себе кобру, которая приподнялась, чтобы броситься мне в лицо). Рог недолго остаётся в таком положении, поэтому я быстро ввожу катетер для пересадки эмбрионов в правый рог и начинаю продвигать его по рогу. Четыре пальца при этом располагаются с медиальной и вентральной стороны рога; ими я расправляю стенку рога по мере продвижения вперёд. Дойдя до изгиба рога, большим и указательным пальцами я тяну рог вперёд и вниз из вертикального или бокового положения, чтобы провести катетер хотя бы на некоторое расстояние за изгиб.
Каждая корова ставит свои задачи. У одних катетер удаётся провести почти до конца рога матки, а у других из-за размеров, упитанности и других особенностей эмбрион приходится вводить вблизи начала изгиба. Главное — не травмировать ткани. Поддерживайте рог снизу плоской поверхностью пальцев. Не сжимайте рог кончиками пальцев и не пытайтесь тянуть его или «нанизывать» на катетер. И то и другое обычно приводит к травме.
При работе с левым рогом, который для меня, поскольку я ввожу в корову левую руку, расположен с неудобной стороны, я сначала размещаю четыре пальца латерально и вентрально от рога, а большой палец — над ним. Я слегка смещаю матку вправо в полости таза, чтобы без травмирования тканей войти в левый рог. Затем продвигаю катетер по рогу, пальцами смещая рог слева направо и выпрямляя путь вперёд. Дойдя до изгиба, я отвожу катетер наружной рукой (правой, находящейся снаружи коровы) как можно дальше вправо (при этом внутри кончик катетера смещается влево). Когда катетер находится в просвете рога на уровне изгиба, я подвожу пальцы под
изгиб к его медиальной стороне и поддерживаю его, насколько возможно распрямляя. Затем продвигаю катетер как можно дальше, не ударяя и не царапая стенку рога, после чего ввожу эмбрион.
Всегда представляйте, что вы плавно вводите катетер в рог матки, а не нанизываете рог на катетер. Нажимая на шток, чтобы вытолкнуть эмбрион, представьте, что вы выдавливаете полоску зубной пасты на щётку. По мере нажатия на шток слегка отводите катетер назад, чтобы его кончик удалялся от выходящего эмбриона. Я также предпочитаю повернуть катетер на 360°, чтобы «снять» эмбрион с кончика, если он вдруг к нему прилип.
Пересадка размороженных эмбрионов
Пересадка замороженных эмбрионов проводится так же, как свежих, за исключением того, что замороженные эмбрионы следует пересаживать сразу после оттаивания, тогда как свежие можно хранить несколько часов (6–8) до пересадки.
О предпочтительном способе оттаивания ведутся споры. Возможны оттаивание в воде, на воздухе или их сочетание. При оттаивании в воде эмбрионы из ёмкости с жидким азотом (–193 °C) сразу погружают в водяную баню с температурой 35 °C. При оттаивании на воздухе эмбрионы держат на воздухе до полного оттаивания. При комбинированном оттаивании эмбрионы извлекают из ёмкости с жидким азотом, держат на воздухе 5–6 с, а затем погружают в воду с температурой 35 °C. При непосредственном погружении эмбрионов в воду возрастает вероятность растрескивания прозрачной оболочки, что может быть нежелательно при международной торговле. Эмбрионы с треснувшей прозрачной оболочкой нельзя замораживать для экспорта, поскольку через трещину к эмбриону могут проникнуть вирусы или бактерии. Показано, что выдерживание соломинки на воздухе в течение 5–6 с (и даже полное оттаивание на воздухе) предотвращает растрескивание прозрачной оболочки. Вместе с тем показано, что трещины в прозрачной оболочке могут способствовать выходу эмбриона из неё: микрофотография выявила, что некоторые эмбрионы не способны самостоятельно разорвать оболочку, необходимое для дальнейшего роста, и в результате погибают. Поэтому я применяю комбинированное оттаивание на воздухе и в воде.
Сегодня большинство специалистов по пересадке эмбрионов используют катетер IMV 52-cm для пересадки эмбрионов с синим чехлом. У чехла тщательно отполированный наконечник из нержавеющей стали, который травмирует эндометрий гораздо меньше, чем прозрачные чехлы или чехлы с зелёной заглушкой для катетера Cassou, применявшиеся при искусственном осеменении в 1970-х — 1990-х годах. Боковое отверстие чехла IMV (в отличие от открытого конца чехла для искусственного осеменения) помогает предотвратить попадание частиц из шейки матки непосредственно в место введения эмбриона.
Показатели успешности пересадки замороженных и размороженных эмбрионов очень близки к показателям для свежих эмбрионов: согласно ежегодным данным, публикуемым Американской ассоциацией по пересадке эмбрионов (AETA), различие обычно не превышает 5%.
Заключение
В заключение хочу призвать вас заняться пересадкой эмбрионов крупного рогатого скота, если вы думаете, что эта работа может вам понравиться. Вы промахнётесь в 100% случаев, когда даже не попытаетесь сделать бросок. Пересадка эмбрионов дополняла нашу ветеринарную практику по лечению крупных животных в течение 13 лет (1977–1990), а последние 23 лет мы занимаемся исключительно ею. Если вы решите работать в этой области, советую вступить в Американскую ассоциацию по пересадке эмбрионов, Канадскую ассоциацию по пересадке эмбрионов или аналогичную ассоциацию в своей стране. Посещайте их собрания, знакомьтесь с коллегами, которые охотно поделятся своими знаниями, и получайте удовольствие от одного из самых интересных направлений ветеринарной деятельности.
Интернет-ресурсы
Американская ассоциация по пересадке эмбрионов: www.aeta.org Канадская ассоциация по пересадке эмбрионов: www.ceta.org Международное общество по пересадке эмбрионов: www.iets.org
*Agtech: http://www.agtechinc.com
*Professional Embryo Transfer Supply: www.pets-inc.com
*Reproduction Resources: www.reproductionresources.com
Stone Manufacturing (поставщик описанного расширителя шейки матки): www.stonemfg.net
*Упомянутые в тексте продукты Bioniche можно приобрести у этих и других поставщиков.
