(a)
Стадия 1 (1 клеток) Стадия 2 (2 клеток)
Стадия 2 (от 4 до 8 клеток)
Стадия 2 (16 клеток)
Стадия 3 (ранняя морула)
Стадия 4 (компактная морула)
Стадия 5 (ранняя бластоциста)
Стадия 6 (бластоциста)
Стадия 7 (расширенная бластоциста)
(b)
Стадия 9 (расширенная вылупившаяся бластоциста)
Рисунок 79.3 (a) Сравнение стадий развития эмбрионов крупного рогатого скота, полученных in vivo и собранных на 6–8-й день после начала охоты. На 7-й день эмбрион с кодом стадии 1 считается неоплодотворённой яйцеклеткой, а эмбрион с кодом стадии 2 — погибшим или дегенерировавшим. (b) Расширенная вылупившаяся бластоциста, обычно извлекаемая на 8-й день после начала охоты или позднее; обратите внимание на пустую блестящую оболочку справа и расширенный эмбрион слева (предоставлено д-ром Брэдом Линдси).
или фрагментированной яйцеклеткой. Однако с практической точки зрения различие между кодами стадии 1 и 2 не имеет значения, поскольку ни тот ни другой объект не пригоден для переноса.
Погибшие или дегенерирующие эмбрионы
Если эмбрионы с кодом стадии 2 извлечены на 7-й день, их стадия развития не соответствует ожидаемой. Поэтому такие
эмбрионы относят к дегенерировавшим (оценка качества 4), поскольку они сильно отстают в развитии. Дегенерировавшими называют эмбрионы, которые были оплодотворены, но погибли на одном из этапов развития.
Эмбрион также может считаться погибшим или дегенерировавшим, если его бластомеры не соединены друг с другом (то есть между «наружными» клетками эмбриона не сформировались плотные межклеточные контакты). Если бластомеры не способны
(a) (b)
(c) (d)
(e) (f)
(g) (h)
Рисунок 79.4 Неоплодотворённые яйцеклетки, извлечённые нехирургическим методом у коров-доноров после суперовуляции через 6–8 дней после начала охоты. Обратите внимание на чрезвычайно большое разнообразие морфологических признаков, затрудняющее точное распознавание таких яйцеклеток неопытными специалистами. (a) Неоплодотворённая яйцеклетка с гладкой вителлиновой мембраной и зернистой цитоплазмой, которую можно принять за компактную морулу. (b) Фрагментированная неоплодотворённая яйцеклетка. (c) Неоплодотворённая яйцеклетка с тёмной цитоплазмой и гладкой вителлиновой мембраной; её можно принять за компактную морулу. (d) Дегенерировавшая неоплодотворённая яйцеклетка. (e) Неоплодотворённая яйцеклетка со светлой зернистой цитоплазмой; обратите внимание на сперматозоиды (стрелки), прикреплённые к блестящей оболочке. (f) Неоплодотворённая яйцеклетка с гладкой вителлиновой мембраной; одна половина яйцеклетки зернистая, другая — прозрачная; её можно принять за эмбрион на стадии бластоцисты. (g) Фрагментированная неоплодотворённая яйцеклетка. (h) Дегенерировавшая неоплодотворённая яйцеклетка; обратите внимание на «исчезновение» вителлиновой мембраны.
образовать плотную, связанную группу, уплотниться и сформировать плотные межклеточные контакты, это признак того, что эмбрион дегенерирует или погибает (рисунки 79.5 и 79.6). На рисунке 79.6 обратите внимание на компактную морулу (a) рядом с дегенерировавшим или погибшим эмбрионом (b).
Эмбрионы, пригодные для переноса
После того как специалист отбраковал неоплодотворённые яйцеклетки и эмбрионы, непригодные для переноса, следует сосредоточиться на оставшихся эмбрионах, пригодных для переноса. В идеале всем таким эмбрионам присваивалась бы оценка качества 1. Однако на практике это не так. У пригодных для переноса эмбрионов встречается ряд «дефектов», из-за которых оценка качества может быть снижена до 2 или 3. Далее эти «дефекты» рассматриваются подробнее.
Каковы признаки эмбриона с оценкой качества 1? По существу, это отсутствие «дефектов», из-за которых ему присвоили бы оценку качества 1. Хотя ряд эмбрионов с оценкой качества 1 уже был показан (например, на рисунках 79.3 и 79.6; e.g.), в дальнейшем основное внимание будет уделено выявлению «дефектов» эмбрионов, приводящих к снижению оценки качества. Тем не менее на многих фотографиях эмбрионы с оценкой качества 1 будут показаны рядом с эмбрионами с оценками качества 2 и 3, а также с неоплодотворёнными яйцеклетками, чтобы облегчить сравнение.
Ряд морфологических особенностей эмбриона можно считать отклонениями от нормы. К таким нарушениям относятся неодинаковые размеры бластомеров, крупные и/или множественные вакуоли в цитоплазме клеток эмбриона, дегенерация одной или нескольких его клеток, отсутствие связи отдельных клеток с остальными клетками эмбриона (то есть наличие вытесненных бластомеров или клеток), а также повреждение или неправильная форма блестящей оболочки. У многих жизнеспособных эмбрионов обнаруживаются некоторые морфологические отклонения, например небольшое число вытесненных клеток. При оценке качества эмбриона необходимо учитывать не только наличие или отсутствие таких отклонений, но и то, насколько сильно они, предположительно, повлияют на выживаемость эмбриона после переноса. Опыт показывает, например, что эмбрион с несколькими дегенерировавшими клетками, состоящий преимущественно из клеток нормального вида, имеет отличные шансы обеспечить наступление беременности и рождение живого телёнка.
Вытесненные клетки
Одно из нарушений, относительно часто встречающихся на доимплантационной стадии развития эмбриона, заключается в том, что не все его клетки продолжают развиваться. В норме все клетки эмбриона соединены друг с другом и взаимодействуют между собой. Однако в некоторых случаях отдельные клетки не участвуют вместе с остальными в нормальном развитии эмбриона. Клетки, не принимающие полноценного участия в этом процессе, называют экструдированными: они не связаны с остальной частью эмбриона и находятся в перивителлиновом пространстве. Экструдированные клетки часто снижают потенциал развития эмбриона, особенно если их вытеснение происходит на раннем этапе. Поэтому размер и количество таких клеток непосредственно влияют на категорию качества эмбриона.
Экструдированные клетки, как правило, не делятся; их вытеснение из эмбриона может происходить на любом этапе развития начиная со стадии 2 клеток. Если значительное число бластомеров эмбриона остаётся здоровым, он может дать начало жизнеспособной беременности даже при наличии экструдированных клеток. Частота наступления беременности зависит
(a) (b)
(c) (d)
(a) (b)
от количества и размера экструдированных клеток. Несколько примеров эмбрионов с такими клетками показаны на рисунках 79.7, 79.8, 79.9, 79.10 и 79.11. Следует учитывать, что у эмбрионов с кодами стадии 6 и 7 экструдированные клетки прижимаются к блестящей оболочке и могут быть незаметны (см. рисунок 79.11) либо приводить к присвоению эмбриону более низкой категории качества, чем он заслуживает (см. рисунок 79.9). Эмбрионы следует поворачивать в чашке Петри, чтобы осмотреть их с разных сторон.
Деформированная или уплощённая блестящая оболочка
Блестящая оболочка считается деформированной, если она не имеет сферической формы либо на ней есть плоский или вогнутый участок, из-за которого эмбрион может прилипать к чашке Петри или соломинке. Одного этого дефекта достаточно, чтобы снизить категорию качества эмбриона на одну ступень (напримерg, с категории качества 1 до категории качества 2). На рисунке 79.12 показан эмбрион крупного рогатого скота на стадии ранней бластоцисты с деформированной блестящей оболочкой.
