Воспроизводство крупного рогатого скота

изображения недостаточно для правильной оценки. Затем эмбрион следует повернуть (с помощью пипетки для манипуляций с эмбрионами или осторожно вращая среду в чашке), чтобы рассмотреть его под другим углом. Рисунок 79.26 состоит из трёх частей (1, 2 и 3), на которых одна и та же группа из восьми эмбрионов показана под тремя разными углами. Обратите внимание, насколько по-разному выглядят одни и те же эмбрионы на этих изображениях. Эти три части рисунка наглядно показывают, почему для правильного выявления всех особенностей каждого эмбриона важно поворачивать его в чашке Петри. Поворот эмбриона и его осмотр под разными углами — ключ к правильной оценке качества и классификации.

Эффективность морфологической оценки эмбрионов

Морфологическая оценка эмбрионов остаётся одним из наиболее субъективных этапов всего процесса трансплантации эмбрионов. Фотографии, представленные в этой главе, изучили несколько эмбриологов. В большинстве случаев они согласились с определёнными для каждого эмбриона стадией развития и категорией качества. Однако по поводу категории качества некоторых эмбрионов возникли небольшие разногласия, чаще всего — между категориями 1 и 2. На двух фотографиях один из специалистов назвал эмбрион на стадии бластоцисты с категорией качества 1 неопознанным объектом. Вероятнее всего, эти расхождения возникли потому, что специалист не мог рассмотреть эмбрионы через стереомикроскоп и повернуть их, чтобы увидеть под разными углами.

Фотографии могут быть прекрасным учебным пособием, но они не заменяют наблюдения за эмбрионами под стереомикроскопом

и возможности поворачивать их. Одно исследование²³ показало, что мнения шести опытных специалистов, оценивавших эмбрионы по видеозаписям, чаще совпадали в отношении стадии развития (89.2%), чем в отношении категории качества эмбрионов (68.5%). Невозможность поворачивать эмбрионы в чашке Петри и рассматривать их под разными углами, несомненно, способствовала этим расхождениям. Разногласия в определении стадии развития могут объясняться тем, что некоторые эмбрионы находились на переходе между двумя стадиями. При оценке качества расхождений было больше, когда требовалось различить эмбрионы хорошего и удовлетворительного качества. Вероятно, это отражает различия в подходах отдельных специалистов к оценке эмбрионов. При оценке эмбрионов отличного качества и дегенерировавших эмбрионов расхождений было меньше. Более частое совпадение мнений при оценке эмбрионов отличного качества, у которых мало «дефектов» или их нет вовсе, а также дегенерировавших эмбрионов, пожалуй, неудивительно.

Успешной оценке эмбрионов способствуют три ключевых условия: надлежащая подготовка, достаточный опыт и подходящее оборудование. Подготовка включает изучение нормальной морфологии эмбрионов в разные сроки после течки и значения любых отклонений от неё. Необходимо также научиться перемещать эмбрионы в чашке Петри, чтобы тщательно их осматривать. Достаточный опыт приобретается при изучении множества эмбрионов на всех стадиях развития и разных категорий качества. В идеале под руководством высококвалифицированного специалиста следует оценить сотни эмбрионов. При наличии подходящего стереомикроскопа опытные специалисты могут правильно оценить более 95% яйцеклеток и эмбрионов. Надлежащее оборудование включает стереомикроскоп с хорошей оптической

системой и достаточным увеличением, подходящие пипетки для манипуляций с эмбрионами (или другие приспособления), а также пригодные чашки Петри и среды для эмбрионов.

Специалисты, оказывающие услуги по трансплантации эмбрионов, обычно используют систему оценки качества и классификации эмбрионов IETS. Хотя эта система субъективна, она позволяет практикующим специалистам и исследователям регистрировать данные в форме, пригодной для последующего анализа. Большинство крупных массивов данных о трансплантации эмбрионов поступает из коммерческой практики, однако свой вклад в накопление знаний внесли и научные исследования.

Например, стадия развития эмбрионов мало влияет на частоту наступления стельности после трансплантации свежих эмбрионов, полученных in vivo от донорских животных, синхронизированным реципиентам, если эмбрионы соответствуют кодам стадий IETS от 4 (компактная морула) до 7 (расширенная бластоциста). Такой результат получен как в исследованиях меньшего масштаба,²⁴ так и в более крупных исследованиях, включавших ретроспективный анализ данных, собранных коммерческими компаниями по трансплантации эмбрионов за несколько лет.²⁵ Однако в последнем исследовании была отмечена более низкая частота наступления стельности после трансплантации вылупившихся бластоцист (код стадии 8).

Аналогичным образом эмбрионы с кодами стадий IETS 4, 5 и 6, полученные in vivo от донорских животных, одинаково хорошо переносят замораживание и оттаивание (то есть частота наступления стельности после трансплантации эмбрионов одной категории качества не различается). Однако категория качества эмбрионов — важнейший фактор, влияющий на то, насколько

хорошо они переносят замораживание и оттаивание. После трансплантации эмбрионов категорий качества 1 и 2 частота наступления стельности обычно выше, чем после трансплантации эмбрионов категории 3. В одном исследовании²⁴не выявило различий в частоте наступления беременности у коров, которым пересадили эмбрионы класса 1 или 2 (74.1% и 71.8% соответственно), тогда как другое исследование¹⁶показало, что при пересадке эмбрионов класса качества 1 вероятность зачатия была выше (отношение шансов 1.62), чем при пересадке эмбрионов класса качества 2 или 3. Сообщалось, что частота зачатия при пересадке эмбрионов класса качества 1 составляла 76% для свежих эмбрионов и 64% для замороженных эмбрионов.²⁶

Заключение

Способность точно определять стадию развития и качество эмбрионов крупного рогатого скота имеет решающее значение для успеха программы пересадки эмбрионов. Чтобы не выбросить жизнеспособные эмбрионы и не пересадить или криоконсервировать неоплодотворённые яйцеклетки, яйцеклетки и эмбрионы, полученные от доноров, необходимо тщательно исследовать с помощью стереомикроскопа. Специалистам, оценивающим эмбрионы, рекомендуется проходить интенсивное и регулярное обучение, а при оценке эмбрионов — последовательно применять единую методику. Для точной оценки всей поверхности прозрачной оболочки, а также всех клеток самого эмбриона крайне важно перекатывать эмбрионы в чашке Петри. При каждом получении эмбрионов от коровы после суперовуляции следует ожидать

разнообразия стадий развития и классов качества эмбрионов. Наиболее надёжный показатель, позволяющий прогнозировать частоту наступления беременности после пересадки эмбриона, — его класс качества: эмбрионы класса качества 1 обеспечивают более высокую частоту наступления беременности, чем эмбрионы класса качества 2 или 3. Ожидается, что замороженные и затем размороженные эмбрионы на стадиях от компактной морулы (код стадии 4) до бластоцисты (код стадии 6) будут обеспечивать сопоставимую частоту наступления беременности при пересадке синхронизированным самкам-реципиентам. Точное ведение учёта позволит специалистам по пересадке эмбрионов отслеживать результаты своей работы и выявлять аспекты, требующие улучшения.

Краткие итоги

Пересадка эмбрионов — репродуктивная биотехнология, способствующая быстрому генетическому улучшению молочного и мясного крупного рогатого скота. Важным фактором, определяющим общий успех пересадки эмбрионов, является качество эмбрионов, полученных от самок-доноров после суперовуляции. Хотя за прошедшие годы для оценки качества эмбрионов применяли различные методы, единственным проверенным и признанным в отрасли методом остаётся морфологическая оценка. Цель этой главы — предоставить читателям сведения, необходимые для точной морфологической оценки качества эмбрионов крупного рогатого скота. Чтобы уверенно овладеть этим методом, требуется значительный опыт, однако освоить его важно, поскольку качество эмбрионов позволяет прогнозировать частоту наступления беременности после их пересадки.

Список литературы

1. Hartman C, Lewis W, Miller F, Swett W. Первые обнаружения яйцеклеток в маточных трубах коровы с замечаниями об эструсе. Anat Rec 1931;48:267–275.

2. Winters, L, Green W, Comstock R. Пренатальное развитие крупного рогатого скота. Технический бюллетень 151, Сельскохозяйственная опытная станция Миннесотского университета, 1942.

3. Hamilton W, Laing J. Развитие яйцеклетки коровы до стадии образования бластоцисты. J Anat 1946;80:194–204 и таблицы иллюстраций.

4. Shea B, Hines D, Lightfoot D, Ollis G, Olson S. Пересадка эмбрионов крупного рогатого скота. В кн.: Rowson LEA (ред.) Пересадка эмбрионов у крупного рогатого скота . Люксембург: издание ЕЭС 5491, 1976, с. 145–152.

5. Trounson A, Willadsen S, Rowson L. Влияние культивирования in vitro и охлаждения на выживаемость и развитие эмбрионов коров. J Reprod Fertil 1976;47:321–327.

6. Renard P, Menezo Y, Saumande J, Heyman Y. Попытки прогнозирования жизнеспособности эмбрионов крупного рогатого скота, полученных после суперовуляции. В кн.: Streenan JR (ред.) Управление воспроизводством у коров . Актуальные вопросы ветеринарной медицины, т. 1. Берлин: Springer Verlag, 1977, с. 398–417.

7. Kardymovicz O. Метод прижизненного окрашивания для определения жизнеспособности оплодотворённых яйцеклеток овец, хранившихся in vitro. В кн.: Материалы

7-го Международного конгресса по воспроизводству животных и искусственному осеменению, Мюнхен, Германия , 1972, с. 503–506.

1. Renard J, Philippon A, Menezo Y. Поглощение глюкозы бластоцистами крупного рогатого скота in vitro. J Reprod Fertil 1980;58:161–164.

2. von Schilling E, Niemann H, Cheng SP, Doepke H-H. DAPI: ещё один флуоресцентный тест для определения жизнеспособности эмбрионов коров и кроликов на ранних стадиях развития. Reprod Domest Anim 1979;14:170–172.

3. Youngs C, Pendleton R, Rorie R, Godke R. Использование компьютеризированной системы анализа изображений для фотометрических и морфометрических измерений эмбрионов крупного рогатого скота до имплантации. Theriogenology 1987;27:299 (аннотация).

4. von Schilling E, Döpke H. Экспресс-тест для определения жизнеспособности ранних эмбрионов крупного рогатого скота и кроликов с использованием диацетата флуоресцеина. Naturwissenschaften 1978;65:658–659.

5. Hoppe R, Bavister B. Оценка теста жизнеспособности с витальным красителем диацетатом флуоресцеина (FDA) на эмбрионах хомяков и крупного рогатого скота. Anim Reprod Sci 1984;6:323–335.

6. von Schilling E, Niemann H, Smidt D. Оценка свежих и замороженных эмбрионов крупного рогатого скота методом флуоресцентной микроскопии. В кн.: Hafez ESE, Semm K (ред.) Оплодотворение in vitro и трансплантация эмбрионов . Нью-Йорк: Alan R. Liss, 1982, с. 349–355.

7. Boland M. Использование яйцевода кролика для предварительной оценки жизнеспособности яйцеклеток млекопитающих. Theriogenology 1984;21:126–137.

8. Shea B. Оценка эмбрионов крупного рогатого скота. Theriogenology 1981;15:31–42.

9. Scenna F, Munar C, Mujica I и соавт. Факторы, влияющие на частоту наступления беременности после программы трансплантации эмбрионов в запланированные сроки у крупного рогатого скота в производственных условиях. Reprod Fertil Dev 2009;21:172 (аннотация).

10. Lindner G, Wright R. Морфология и оценка эмбрионов крупного рогатого скота. Theriogenology 1983;20:407–416.

11. Stringfellow D, Seidel S. Руководство Международного общества трансплантации эмбрионов , 3-е изд. Шампейн, Иллинойс: Международное общество трансплантации эмбрионов, 1998.

12. Stringfellow D. Рекомендации по санитарной обработке эмбрионов, полученных in vivo. В кн.: Stringfellow DA, Givens MD (ред.) Руководство Международного общества трансплантации эмбрионов , 4-е изд. Шампейн, Иллинойс: Международное общество трансплантации эмбрионов, 2010, с. 65–68.

13. Stringfellow D, Givens M. Руководство Международного общества трансплантации эмбрионов , 4-е изд. Шампейн, Иллинойс: Международное общество трансплантации эмбрионов, 2010.

14. Stroud B. Отчёт об исследовании AETA за 2009 г. http://www.aeta.org/ docs/09statsreport.pdf. Загружено в январе 13 г., 2013.

15. Steel R, Hasler J. Частота наступления беременности после трансплантации свежих и замороженных эмбрионов коров голштинской и джерсейской пород. Reprod Fertil Dev 2004;16:182–183 (аннотация).

16. Farin P, Britt J, Shaw D, Slenning B. Согласованность оценок специалистов при исследовании эмбрионов крупного рогатого скота, полученных in vivo или in vitro. Theriogenology 1995;44:339–349.

17. Spell A, Beal W, Corah L, Lamb C. Оценка факторов, связанных с реципиентами и эмбрионами, которые влияют на частоту наступления беременности после трансплантации эмбрионов у мясного крупного рогатого скота. Theriogenology 2001;56:287–297.

18. Hasler J. Трансплантация эмбрионов крупного рогатого скота: повышается ли её эффективность? В сб.: Материалы конференции «Прикладные стратегии воспроизводства мясного крупного рогатого скота», Нэшвилл, штат Теннесси , 2010, с. 265–282.

19. Hasler J. Современное состояние и перспективы получения ооцитов, производства эмбрионов in vitro и трансплантации эмбрионов у домашних животных с особым вниманием к крупному рогатому скоту. J Anim Sci 1998;76(прил. 3):52–74.