Спадение полости бластоцеля считается нормальным физиологическим процессом и само по себе не приводит к снижению категории качества, за исключением случаев, когда блестящая оболочка также деформирована. На рисунке 79.18 показана группа эмбрионов нормальной и неправильной формы.
Материал, прилипший к блестящей оболочке
При извлечении эмбрионов нередко обнаруживается, что к наружной поверхности блестящей оболочки некоторых из них прилип материал. Это могут быть слизь, отдельные клетки или комочек ткани. Прилипший к блестящей оболочке материал может указывать на эндометрит у донорской коровы; это также могут быть клетки кумулюса, не отделившиеся при обычном перемещении гамет, или клетки эндометрия донорской коровы. На рисунках 79.19 и 79.20 показаны эмбрионы крупного рогатого скота с прилипшим материалом. Прилипшие
остатки часто можно смыть с блестящей оболочки при промывании эмбрионов по процедуре, одобренной IETS.19 В некоторых случаях может потребоваться промывание в растворе трипсина 0.25%. Промывание эмбрионов с неповреждённой блестящей оболочкой в соответствии с рекомендациями IETS должно удалять прилипшие остатки, а также многие патогены.
Наличие остатков, прилипших к наружной поверхности блестящей оболочки, не обязательно влияет на присвоение эмбриону категории качества. Однако любой эмбрион с прилипшим материалом не допускается к коммерческой торговле ни внутри страны, ни на международном рынке.
Трудности точной оценки качества и классификации эмбрионов
Одна из самых сложных задач для специалистов, обучающихся оценивать качество и классифицировать эмбрионы, — правильно отличать компактную морулу от неоплодотворённой яйцеклетки (UFO): эти два объекта могут быть очень похожи по размеру, форме и цвету. На рисунке 79.21 рядом показаны компактные морулы и неоплодотворённые яйцеклетки, и нетрудно представить, как неопытный специалист может по ошибке описать все эти объекты либо как компактные морулы, либо как неоплодотворённые яйцеклетки. Особенно вероятна такая ошибка при изучении образцов с меньшим увеличением или с помощью стереомикроскопа с низким качеством оптики. Компактная морула отличного качества и UFO при большем увеличении показаны на рисунках 79.22 и 79.23. Эти изображения хорошо показывают, насколько трудно иногда различить такие две стадии развития. Как отмечалось ранее, исключительно важно уметь отличать компактную морулу от UFO, чтобы не допустить переноса (или криоконсервации) неоплодотворённой яйцеклетки и/или выбраковки компактной морулы. По мере накопления опыта оценки эмбрионов различать эти две стадии становится легче.
Другая распространённая ошибка классификации возникает, когда часть неоплодотворённой яйцеклетки дегенерирует и светлеет, становясь похожей на полость бластоцеля у эмбриона на стадии бластоцисты (рисунок 79.24). Опытные специалисты могут различить эти объекты по слою трофобласта, который «окружает» полость бластоцеля у эмбриона на стадии бластоцисты, а также по клеткам внутренней клеточной массы (ICM), которые присутствуют только в бластоцисте.
(a)
(b)
Рисунок 79.22 Неоплодотворённая яйцеклетка (a) и эмбрион на стадии компактной морулы отличного качества (b).
Совет по оценке эмбрионов
Хотя неопытные специалисты могут допускать серьёзные ошибки при оценке качества и классификации эмбрионов, опытные эмбриологи редко ошибаются настолько сильно. Чаще всего опытные специалисты расходятся во мнениях при разграничении эмбрионов отличного или хорошего и удовлетворительного качества, а также при разграничении
(a)
(b)
(a)
(b)
Рисунок 79.24 Дегенерирующая неоплодотворённая яйцеклетка с полупрозрачным участком (a) и эмбрион отличного качества на стадии ранней бластоцисты (b), у которого различимы слой трофобласта, полость бластоцеля и клетки внутренней клеточной массы.
эмбрионов удовлетворительного и низкого качества. Это связано с субъективным характером процедуры оценки эмбрионов.
Чтобы избежать ошибок при классификации эмбрионов и оценке их качества, крайне важно поворачивать эмбрионы в чашке Петри. Это позволяет специалисту тщательно осмотреть всю поверхность блестящей оболочки, а также клетки, составляющие эмбрион, со всех сторон. Это особенно важно, когда от донорских животных получают большое количество яйцеклеток и эмбрионов на разных стадиях развития и различного качества (рисунок 79.25). Тщательный визуальный осмотр снижает вероятность ошибок при оценке качества и классификации эмбрионов.
Каждый эмбрион следует осматривать отдельно, меняя фокусировку, и помнить при этом, что эмбрион — трёхмерный объект и одного двумерного
