(a) (b)
(c) (d)
(e) (f)
(g) (h)
Рисунок 79.4 Неоплодотворённые яйцеклетки, извлечённые нехирургическим методом у коров-доноров после суперовуляции через 6–8 дней после начала охоты. Обратите внимание на чрезвычайно большое разнообразие морфологических признаков, затрудняющее точное распознавание таких яйцеклеток неопытными специалистами. (a) Неоплодотворённая яйцеклетка с гладкой вителлиновой мембраной и зернистой цитоплазмой, которую можно принять за компактную морулу. (b) Фрагментированная неоплодотворённая яйцеклетка. (c) Неоплодотворённая яйцеклетка с тёмной цитоплазмой и гладкой вителлиновой мембраной; её можно принять за компактную морулу. (d) Дегенерировавшая неоплодотворённая яйцеклетка. (e) Неоплодотворённая яйцеклетка со светлой зернистой цитоплазмой; обратите внимание на сперматозоиды (стрелки), прикреплённые к блестящей оболочке. (f) Неоплодотворённая яйцеклетка с гладкой вителлиновой мембраной; одна половина яйцеклетки зернистая, другая — прозрачная; её можно принять за эмбрион на стадии бластоцисты. (g) Фрагментированная неоплодотворённая яйцеклетка. (h) Дегенерировавшая неоплодотворённая яйцеклетка; обратите внимание на «исчезновение» вителлиновой мембраны.
образовать плотную, связанную группу, уплотниться и сформировать плотные межклеточные контакты, это признак того, что эмбрион дегенерирует или погибает (рисунки 79.5 и 79.6). На рисунке 79.6 обратите внимание на компактную морулу (a) рядом с дегенерировавшим или погибшим эмбрионом (b).
Эмбрионы, пригодные для переноса
После того как специалист отбраковал неоплодотворённые яйцеклетки и эмбрионы, непригодные для переноса, следует сосредоточиться на оставшихся эмбрионах, пригодных для переноса. В идеале всем таким эмбрионам присваивалась бы оценка качества 1. Однако на практике это не так. У пригодных для переноса эмбрионов встречается ряд «дефектов», из-за которых оценка качества может быть снижена до 2 или 3. Далее эти «дефекты» рассматриваются подробнее.
Каковы признаки эмбриона с оценкой качества 1? По существу, это отсутствие «дефектов», из-за которых ему присвоили бы оценку качества 1. Хотя ряд эмбрионов с оценкой качества 1 уже был показан (например, на рисунках 79.3 и 79.6; e.g.), в дальнейшем основное внимание будет уделено выявлению «дефектов» эмбрионов, приводящих к снижению оценки качества. Тем не менее на многих фотографиях эмбрионы с оценкой качества 1 будут показаны рядом с эмбрионами с оценками качества 2 и 3, а также с неоплодотворёнными яйцеклетками, чтобы облегчить сравнение.
Ряд морфологических особенностей эмбриона можно считать отклонениями от нормы. К таким нарушениям относятся неодинаковые размеры бластомеров, крупные и/или множественные вакуоли в цитоплазме клеток эмбриона, дегенерация одной или нескольких его клеток, отсутствие связи отдельных клеток с остальными клетками эмбриона (то есть наличие вытесненных бластомеров или клеток), а также повреждение или неправильная форма блестящей оболочки. У многих жизнеспособных эмбрионов обнаруживаются некоторые морфологические отклонения, например небольшое число вытесненных клеток. При оценке качества эмбриона необходимо учитывать не только наличие или отсутствие таких отклонений, но и то, насколько сильно они, предположительно, повлияют на выживаемость эмбриона после переноса. Опыт показывает, например, что эмбрион с несколькими дегенерировавшими клетками, состоящий преимущественно из клеток нормального вида, имеет отличные шансы обеспечить наступление беременности и рождение живого телёнка.
Вытесненные клетки
Одно из нарушений, относительно часто встречающихся на доимплантационной стадии развития эмбриона, заключается в том, что не все его клетки продолжают развиваться. В норме все клетки эмбриона соединены друг с другом и взаимодействуют между собой. Однако в некоторых случаях отдельные клетки не участвуют вместе с остальными в нормальном развитии эмбриона. Клетки, не принимающие полноценного участия в этом процессе, называют экструдированными: они не связаны с остальной частью эмбриона и находятся в перивителлиновом пространстве. Экструдированные клетки часто снижают потенциал развития эмбриона, особенно если их вытеснение происходит на раннем этапе. Поэтому размер и количество таких клеток непосредственно влияют на категорию качества эмбриона.
Экструдированные клетки, как правило, не делятся; их вытеснение из эмбриона может происходить на любом этапе развития начиная со стадии 2 клеток. Если значительное число бластомеров эмбриона остаётся здоровым, он может дать начало жизнеспособной беременности даже при наличии экструдированных клеток. Частота наступления беременности зависит
(a) (b)
(c) (d)
(a) (b)
от количества и размера экструдированных клеток. Несколько примеров эмбрионов с такими клетками показаны на рисунках 79.7, 79.8, 79.9, 79.10 и 79.11. Следует учитывать, что у эмбрионов с кодами стадии 6 и 7 экструдированные клетки прижимаются к блестящей оболочке и могут быть незаметны (см. рисунок 79.11) либо приводить к присвоению эмбриону более низкой категории качества, чем он заслуживает (см. рисунок 79.9). Эмбрионы следует поворачивать в чашке Петри, чтобы осмотреть их с разных сторон.
Деформированная или уплощённая блестящая оболочка
Блестящая оболочка считается деформированной, если она не имеет сферической формы либо на ней есть плоский или вогнутый участок, из-за которого эмбрион может прилипать к чашке Петри или соломинке. Одного этого дефекта достаточно, чтобы снизить категорию качества эмбриона на одну ступень (напримерg, с категории качества 1 до категории качества 2). На рисунке 79.12 показан эмбрион крупного рогатого скота на стадии ранней бластоцисты с деформированной блестящей оболочкой.
Липиды в цитоплазме
Хотя липиды являются необходимым компонентом клеточных мембран и должны присутствовать в жизнеспособных эмбрионах, у некоторых эмбрионов наблюдается аномальное накопление липидных капель (также называемых вакуолями) в цитоплазме отдельных клеток. Большинство специалистов снижают категорию качества эмбриона, если в нём имеется более нескольких мелких вакуолей. Высокое содержание липидов в цитоплазме может быть одной из причин снижения частоты наступления беременности после переноса замороженных и оттаянных эмбрионов, особенно эмбрионов молочного скота джерсейской породы.22 На рисунках 79.13 и 79.14 показаны вакуоли в отдельных клетках эмбрионов крупного рогатого скота.
Трещина в блестящей оболочке
Обычно трещина в блестящей оболочке обнаруживается только у эмбрионов на стадии вылупляющейся бластоцисты (код стадии 8). Однако у некоторых эмбрионов она может появиться и на более ранних
(a) (b)
Рисунок 79.11 Оба эмбриона, (a) и (b), относятся к категории IETS 6-1. У эмбрионов на стадиях 6 и 7 экструдированные клетки часто прижаты к блестящей оболочке и могут быть незаметны, если эмбрион не спался. (a) Не повернув этот эмбрион и не получив хорошего обзора полости бластоцеля, которая скрыта расположенными сверху экструдированными клетками, трудно определить, что это бластоциста. Его легко принять за дегенерирующую неоплодотворённую яйцеклетку.
стадиях развития, предположительно из-за гидростатического давления, воздействующего на эмбрион при его извлечении (рисунки 79.15, 79.16 и 79.17). Хотя трещина в блестящей оболочке не приводит автоматически к снижению категории качества эмбриона, надлежащим образом промыть можно только эмбрионы с неповреждённой блестящей оболочкой; только они19 сохраняют право на экспорт. Однако эмбрион с трещиной всё же можно заморозить для использования внутри страны.
Неправильная форма клеточной массы эмбриона
Неправильная форма клеточной массы эмбриона наблюдается часто, особенно у эмбрионов на стадии бластоцисты, когда формируется полость бластоцеля.
