потенциальных реципиентов. Возможно, в этом обсуждении вы найдёте для себя пару полезных идей.
Дефицит минеральных веществ
В каждом регионе США существуют свои потребности в дополнительном введении минеральных веществ. Вам следует знать потребности своего региона.
Отбор животных в группу потенциальных реципиентов
Я часто говорю: «По внешнему виду коровы можно судить о состоянии её внутренних органов». Коровы с неудовлетворительной упитанностью, тусклой шерстью, которых содержат в грязных загонах, обычно не лучший выбор. Итак, при отборе мы обращаем внимание на следующее. ( Примечание редактора : Отбор реципиентов и управление стадом подробно рассматриваются в главе 78. Ниже дан обзор аспектов, которые автор считает решающими для общего успеха программы трансплантации эмбрионов.)
Размер
Трудные роды — наш враг. Мёртвые телята никого не впечатляют, особенно нашего банкира. При включении коров в группу реципиентов учитывайте ожидаемую массу телёнка при рождении в зависимости от породы эмбриона. Если используются тёлки, я в основном выбираю только помесей молочных пород или крупных тёлок мясных пород массой не менее 360 kg на момент начала синхронизации (вообще-то я предпочитаю тёлок массой 385–408 kg).
Молочная продуктивность
Здоровое вымя — наш союзник. Получить живого телёнка — лишь выиграть первую схватку. Реципиент должна давать достаточно молока, чтобы вырастить отличного телёнка. При пересадке эмбрионов молочных пород это неважно, поскольку телят будут выпаивать из бутылки.
Предшествующая история
По возможности очень полезно знать, что реципиент регулярно телилась и каждый год рано приходила в охоту. Однако часто такие сведения недоступны.
Темперамент
Неуправляемые реципиенты мне ни к чему. С каждой приходится часто работать, поэтому спокойный нрав — важное подспорье. Он также передаётся телёнку, который должен представлять гораздо большую ценность, чем его мать.
Минимальный стресс
Стрессовые факторы необходимо устранять. Нужны подходящие укрытия от зимнего холода и от жары в остальные месяцы. Загоны, раскисшие от грязи, — враги. Травянистые пастбища — друзья. Свежая вода — друг. Застоявшаяся вода в прудах или поилках — враг. Для успеха необходимо отличное качество кормовых трав.
Биобезопасность
Несколько заболеваний могут сорвать программу трансплантации эмбрионов; они подробно рассматриваются в главе 80. Проверяйте всех реципиентов и исключайте из стада животных с положительным результатом анализа на следующие заболевания.
Вирус вирусной диареи крупного рогатого скота
Животные с персистентной инфекцией вирусом вирусной диареи крупного рогатого скота (BVDV) появляются, когда стельная корова подвергается воздействию BVDV между 30 и 150 днями стельности. Если такие животные рождаются живыми, они выделяют жизнеспособный BVDV с рождения до смерти. Большинство погибает к возрасту 1 года, но сообщения о животных, проживших до 7 лет, подчёркивают необходимость их выявления и удаления из стада. У всех животных моложе 6 месяцев берите образец ткани из ушной раковины, а у остальных исследуйте сыворотку методом ИФА или также берите образец ткани из ушной раковины.
Лактация
Лактирующие коровы в хорошей упитанности обычно становятся отличными реципиентами. Как правило, коров можно использовать через 45–50 дней после отёла если они находятся в хорошем состоянии. Сухостойные коровы — отличные реципиенты, если их намеренно оставили нестельными. Но если у них были проблемы с осеменением, они уже отлучили телёнка или их запустили, лучше их не использовать.
Оценка упитанности
Оптимальная для плодовитости оценка упитанности (BCS) составляет 4–6 по шкале из 1–9 баллов. Если у мясного крупного рогатого скота с BCS 3 заметно выступают рёбра и позвоночник, такие коровы, как правило, находятся на грани прекращения половой цикличности. Если цикл у них вообще сохраняется, жёлтые тела обычно меньше и плотнее. Результаты использования таких коров обычно разочаровывают. Чрезмерно упитанные коровы и тёлки приобрели дурную репутацию из-за представления о том, что «жирные коровы бесплодны». Однако мой опыт показывает, что если корова растолстела потому, что её намеренно оставили нестельной или перекармливали, её плодовитость всё же будет вполне приемлемой. Но если реципиент уже пересадили два эмбриона или провели несколько безуспешных попыток искусственного осеменения (не более трёх), её следует пустить к быку или выбраковать.
Neospora canis
Это заболевание, связанное с псовыми, вызывает аборты у заражённых коров и, как предполагается, встречается главным образом к западу от реки Миссисипи. За последние 8 лет мы обследовали более 8000 реципиентов мясных пород и помесей мясных и молочных пород в Теннесси, Кентукки и Алабаме и обнаружили заражение у 9% из них. Neospora -положительные коровы заражают 100% своих телят внутриутробно . Бычки заражаются, но не страдают от болезни и не могут её передавать. У самок возможен аборт; если же его не происходит, они заражают каждую рождённую ими тёлочку. Коровы заражаются Neospora при поедании сена, силоса или корма, загрязнённых фекалиями псовых, содержащими ооцисты Neospora (собак или койотов). Neospora -положительных доноров можно безопасно подвергать вымыванию эмбрионов, пересаживая полученные эмбрионы отрицательным реципиентам. Используйте доступные серологические анализы на Neospora .
Болезнь Йоне
Исследование сыворотки ненадёжно, но подходит для предварительного скрининга. Лучше всего бактериологическое исследование кала, однако оно требует много времени. Тестирование и удаление животных с положительным результатом должны поддерживать низкую распространённость инфекции в стаде. Заражённые коровы передают болезнь Йоне внутриутробно 26%
случаев. Большинство остальных случаев заражения происходит через рот, когда новорождённый телёнок сосёт соски коровы.
Лейкоз крупного рогатого скота
Некоторым молочным хозяйствам удалось получить стада, свободные от вируса лейкоза крупного рогатого скота (BLV), благодаря выбраковке животных, разделению стад и использованию молозива от коров, свободных от BLV. При нынешнем уровне заражённости в Соединённых Штатах сделать это очень трудно. Лучшая профилактическая мера — тестировать коров и выделять животных с положительным результатом в отдельное стадо либо, если возможно, продавать их. Вирус передаётся с кровью при использовании одних и тех же игл, одной и той же перчатки-рукава для ректального исследования всех коров, а также через крупных кровососущих насекомых. Для профилактики используют новую иглу для каждой коровы, меняют перчатку-рукав после каждого животного и дают молозиво от коров с отрицательными результатами анализов.
Вакцинация
Всех реципиентов следует вакцинировать против BVDV, вируса инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота (IBR), вируса парагриппа 3, респираторно-синцитиального вируса крупного рогатого скота и лептоспироза. По моему мнению, инактивированные вирусные вакцины безопаснее, но менее эффективны. Для нестельных животных лучше всего подходят вакцины на основе модифицированного живого вируса (MLV), обеспечивающие защиту плода от BVDV. Если используется вакцина MLV против IBR, плодовитость реципиентов в течение 30 дней будет снижена: вирус IBR поражает жёлтое тело, что приводит к снижению уровня прогестерона. Соблюдайте осторожность. К стандартной пятивалентной вакцине против лептоспироза необходимо добавить вакцину, содержащую Leptospira borgpetersonii (серовар Hardjo). Этот вариант вызывает не только аборты, но и бесплодие, а также раннюю гибель эмбрионов. Он стал серьёзной проблемой на большей части территории Соединённых Штатов. При необходимости применяйте и другие вакцины с учётом условий вашего региона.
Синхронизация реципиентов
Синхронизация охоты рассматривается в главе 33. Используйте способ, который лучше всего подходит для вашего хозяйства. Опыт и данные показали нам, что естественная охота не обеспечивает более высокую плодовитость, чем индуцированная. Сегодня многие специалисты применяют протоколы трансплантации эмбрионов в фиксированное время, при которых выявлять охоту не требуется. Этот метод предпочтителен для хозяйств со средним уровнем организации работы и неудовлетворительным выявлением охоты. Если хозяйство хорошо организовано и располагает отлично обученными сотрудниками, умеющими выявлять охоту, я предпочитаю ориентироваться на наблюдаемую охоту. При работе с очень ценными эмбрионами такой подход надёжнее.
Трансплантация эмбрионов в фиксированное время даёт немного меньшую долю стельных животных, но позволяет получить больше стельностей в группе реципиентов. Например, если в группе синхронизированы 100 реципиентов и охоту выявляют и регистрируют, примерно у 85 из них она будет замечена в допустимый период, или временное «окно». В среднем у 75 из этих 85 будут хорошие жёлтые тела, и им пересадят эмбрион. Если трансплантацию в фиксированное время применить к 100 реципиентам, примерно у 92 из них будут жёлтые тела, то есть будет пересажено 92 эмбрионов. При доле стельных животных 60% в группе с наблюдаемой охотой и 55% в группе с трансплантацией в фиксированное время общее число стельностей составит соответственно 45 и 50.6 (причём во втором случае труд на выявление охоты не затрачивается).
Допустимая степень синхронности реципиентов
Обычно мы используем реципиентов, у которых охота наступила в пределах от 24 часов до охоты у донора (охота на 8-й день) до 48 часов после неё (охота на 5-й день). Разумеется, реципиенты 7-го дня всегда предпочтительнее. Необходимо учитывать несколько обстоятельств.
-
Свежие эмбрионы переносят большую асинхронность, чем замороженные. Для замороженных эмбрионов я предпочитаю реципиентов от дня 7 (полная синхронность) до дня 5.5 (36 часов после донора), тогда как для свежих эмбрионов подходят реципиенты 5–8-го дня.
-
Если в определённый день получено больше эмбрионов, чем имеется реципиентов, эмбрионы класса 2 и класса 3 обычно пересаживают свежими, а эмбрионы класса 1 замораживают (см. оценку эмбрионов в главе 79).
-
Замороженные эмбрионы подверглись стрессу, поэтому нуждаются в более точной синхронизации. Я редко использую реципиента 8-го дня, но без колебаний использую реципиента 5.5-го дня для замороженных эмбрионов.
-
• Сегодня широко доступны эмбрионы, полученные методом IVF, как свежие, так и замороженные. Для эмбрионов IVF мы применяем те же критерии синхронности, что и для замороженных эмбрионов.
Подготовка реципиента
И вот наконец мы заводим первого реципиента в станок. К реципиентам применим тот же принцип кормления, что и к донорам: наполненный рубец — наш друг, пустой — враг. Никогда не лишайте животных корма: при наполненном животе проводить трансплантацию гораздо легче.
Когда реципиент входит в станок, я эпидурально ввожу 3–5 mL лидокаина и быстро провожу пальпацию, чтобы убедиться в наличии хорошего жёлтого тела. Если жёлтое тело хорошее, а состояние матки при пальпации приемлемо, я заряжаю соломинку с эмбрионом в инструмент IMV для трансплантации эмбрионов размером 52–cm с синим чехлом и сразу же пересаживаю эмбрион. Каждой реципиенту я обязательно устанавливаю идентификационную ушную бирку с указанием родительской пары и предполагаемой даты отёла.
Всегда возникает вопрос, допустимо ли перегонять или перевозить реципиентов к месту трансплантации и обратно. Единственное, что вызывает у меня сомнения, — очень жаркая или очень холодная погода. Перевозка на небольшое расстояние не должна влиять на долю стельных животных.
Место введения эмбриона
Эмбрионы следует вводить в рог матки со стороны жёлтого тела как можно глубже, но не травмируя ткани (рисунок 76.17). Простагландин — наш враг; он присутствует в клетках эндометрия. Если, продвигая инструмент для трансплантации эмбрионов по рогу матки, мы повреждаем ткани, из каждой повреждённой клетки «вытекает» PGF2α. Чтобы плавно направлять инструмент, не задевая и не «ударяя» стенку матки, нужно осторожно надавливать на него плоско расположенными пальцами. Для этого необходимы следующие условия.
Фиксация реципиента
Некоторые животные стоят спокойнее, когда их голова не зафиксирована в головном фиксаторе, тогда как других необходимо зафиксировать и зажать. Очень досадно, когда эмбрион уже почти доставлен к месту введения, а реципиентка внезапно начинает неистово вырываться или пугается
(a)
(b)
Место введения
Жёлтое тело
Рисунок 76.17 Место введения эмбриона. CL — жёлтое тело.
человека, подошедшего к её голове, или чьего-то крика. При пересадке большинства эмбрионов я фиксирую голову животного в станке или стойле, но мне также удобно работать, когда за бёдрами животного установлена низкая перекладина, а голова не зафиксирована, если только животное не слишком буйное.
Опора для ног
Устойчивая опора для ног — один из главных факторов, определяющих готовность животного стоять спокойно. На металлическом или скользком бетонном полу животные паникуют и пытаются вырваться. Хороший слой подстилки в станке очень помогает.
Климатические условия
Работа с перегревшимися животными даёт плохие результаты. Нужно приложить все усилия, чтобы не проводить процедуру в жаркое время дня, либо обеспечить работу вентиляторов и хорошую циркуляцию воздуха. Животным должно быть доступно достаточно воды. В жару следует свести перегон скота к минимуму. Низкие температуры обычно не представляют проблемы, если только холод не становится экстремальным или не сопровождается сыростью и грязью, когда животным негде лечь на сухое место. Комфорт реципиентки способствует успеху.
Введение эмбриона: бережно и быстро
По мере накопления опыта ваша техника работы внутри коровы будет совершенствоваться. Главное правило — действовать бережно и быстро. Данные показывают, что время прохождения через шейку матки мало влияет на частоту наступления беременности, но увеличение времени продвижения по рогу матки обычно снижает вероятность успеха. Чтобы объяснить, как действовать бережно и быстро, я опишу применяемые мной приёмы манипуляции с маткой. Помните, что внутри коровы я работаю левой рукой, поэтому, если вы вводите правую руку, выполняйте описанные действия зеркально. Вот последовательность действий, которой я придерживаюсь после эпидуральной анестезии реципиентки и проверки наличия жёлтого тела.
После эпидуральной анестезии, прежде чем ввести руку в прямую кишку, я ввожу катетер для пересадки эмбрионов во влагалище и продвигаю его почти до шейки матки. Затем я проталкиваю катетер сквозь тонкую пластиковую защитную оболочку, надетую поверх синего чехла. После этого ввожу руку в прямую кишку, нахожу шейку матки и вытягиваю её вперёд, расправляя складки влагалища, которые могут мешать продвижению катетера. Затем провожу катетер для пересадки эмбрионов до четвёртой кольцевой складки шейки матки и удерживаю его там. Если жёлтое тело находится справа, прежде чем провести катетер в тело матки, я оттягиваю шейку матки назад, затем продвигаю руку вперёд и подтягиваю конец правого рога матки вверх и назад (я представляю себе кобру, которая приподнялась, чтобы броситься мне в лицо). Рог недолго остаётся в таком положении, поэтому я быстро ввожу катетер для пересадки эмбрионов в правый рог и начинаю продвигать его по рогу. Четыре пальца при этом располагаются с медиальной и вентральной стороны рога; ими я расправляю стенку рога по мере продвижения вперёд. Дойдя до изгиба рога, большим и указательным пальцами я тяну рог вперёд и вниз из вертикального или бокового положения, чтобы провести катетер хотя бы на некоторое расстояние за изгиб.
Каждая корова ставит свои задачи. У одних катетер удаётся провести почти до конца рога матки, а у других из-за размеров, упитанности и других особенностей эмбрион приходится вводить вблизи начала изгиба. Главное — не травмировать ткани. Поддерживайте рог снизу плоской поверхностью пальцев. Не сжимайте рог кончиками пальцев и не пытайтесь тянуть его или «нанизывать» на катетер. И то и другое обычно приводит к травме.
При работе с левым рогом, который для меня, поскольку я ввожу в корову левую руку, расположен с неудобной стороны, я сначала размещаю четыре пальца латерально и вентрально от рога, а большой палец — над ним. Я слегка смещаю матку вправо в полости таза, чтобы без травмирования тканей войти в левый рог. Затем продвигаю катетер по рогу, пальцами смещая рог слева направо и выпрямляя путь вперёд. Дойдя до изгиба, я отвожу катетер наружной рукой (правой, находящейся снаружи коровы) как можно дальше вправо (при этом внутри кончик катетера смещается влево). Когда катетер находится в просвете рога на уровне изгиба, я подвожу пальцы под
