Воспроизводство крупного рогатого скота

(a)
(b)

Рисунок 79.22 Неоплодотворённая яйцеклетка (a) и эмбрион на стадии компактной морулы отличного качества (b).

Совет по оценке эмбрионов

Хотя неопытные специалисты могут допускать серьёзные ошибки при оценке качества и классификации эмбрионов, опытные эмбриологи редко ошибаются настолько сильно. Чаще всего опытные специалисты расходятся во мнениях при разграничении эмбрионов отличного или хорошего и удовлетворительного качества, а также при разграничении

(a)
(b)

(a)
(b)

Рисунок 79.24 Дегенерирующая неоплодотворённая яйцеклетка с полупрозрачным участком (a) и эмбрион отличного качества на стадии ранней бластоцисты (b), у которого различимы слой трофобласта, полость бластоцеля и клетки внутренней клеточной массы.

эмбрионов удовлетворительного и низкого качества. Это связано с субъективным характером процедуры оценки эмбрионов.

Чтобы избежать ошибок при классификации эмбрионов и оценке их качества, крайне важно поворачивать эмбрионы в чашке Петри. Это позволяет специалисту тщательно осмотреть всю поверхность блестящей оболочки, а также клетки, составляющие эмбрион, со всех сторон. Это особенно важно, когда от донорских животных получают большое количество яйцеклеток и эмбрионов на разных стадиях развития и различного качества (рисунок 79.25). Тщательный визуальный осмотр снижает вероятность ошибок при оценке качества и классификации эмбрионов.

Каждый эмбрион следует осматривать отдельно, меняя фокусировку, и помнить при этом, что эмбрион — трёхмерный объект и одного двумерного

изображения недостаточно для правильной оценки. Затем эмбрион следует повернуть (с помощью пипетки для манипуляций с эмбрионами или осторожно вращая среду в чашке), чтобы рассмотреть его под другим углом. Рисунок 79.26 состоит из трёх частей (1, 2 и 3), на которых одна и та же группа из восьми эмбрионов показана под тремя разными углами. Обратите внимание, насколько по-разному выглядят одни и те же эмбрионы на этих изображениях. Эти три части рисунка наглядно показывают, почему для правильного выявления всех особенностей каждого эмбриона важно поворачивать его в чашке Петри. Поворот эмбриона и его осмотр под разными углами — ключ к правильной оценке качества и классификации.

Эффективность морфологической оценки эмбрионов

Морфологическая оценка эмбрионов остаётся одним из наиболее субъективных этапов всего процесса трансплантации эмбрионов. Фотографии, представленные в этой главе, изучили несколько эмбриологов. В большинстве случаев они согласились с определёнными для каждого эмбриона стадией развития и категорией качества. Однако по поводу категории качества некоторых эмбрионов возникли небольшие разногласия, чаще всего — между категориями 1 и 2. На двух фотографиях один из специалистов назвал эмбрион на стадии бластоцисты с категорией качества 1 неопознанным объектом. Вероятнее всего, эти расхождения возникли потому, что специалист не мог рассмотреть эмбрионы через стереомикроскоп и повернуть их, чтобы увидеть под разными углами.

Фотографии могут быть прекрасным учебным пособием, но они не заменяют наблюдения за эмбрионами под стереомикроскопом

и возможности поворачивать их. Одно исследование²³ показало, что мнения шести опытных специалистов, оценивавших эмбрионы по видеозаписям, чаще совпадали в отношении стадии развития (89.2%), чем в отношении категории качества эмбрионов (68.5%). Невозможность поворачивать эмбрионы в чашке Петри и рассматривать их под разными углами, несомненно, способствовала этим расхождениям. Разногласия в определении стадии развития могут объясняться тем, что некоторые эмбрионы находились на переходе между двумя стадиями. При оценке качества расхождений было больше, когда требовалось различить эмбрионы хорошего и удовлетворительного качества. Вероятно, это отражает различия в подходах отдельных специалистов к оценке эмбрионов. При оценке эмбрионов отличного качества и дегенерировавших эмбрионов расхождений было меньше. Более частое совпадение мнений при оценке эмбрионов отличного качества, у которых мало «дефектов» или их нет вовсе, а также дегенерировавших эмбрионов, пожалуй, неудивительно.

Успешной оценке эмбрионов способствуют три ключевых условия: надлежащая подготовка, достаточный опыт и подходящее оборудование. Подготовка включает изучение нормальной морфологии эмбрионов в разные сроки после течки и значения любых отклонений от неё. Необходимо также научиться перемещать эмбрионы в чашке Петри, чтобы тщательно их осматривать. Достаточный опыт приобретается при изучении множества эмбрионов на всех стадиях развития и разных категорий качества. В идеале под руководством высококвалифицированного специалиста следует оценить сотни эмбрионов. При наличии подходящего стереомикроскопа опытные специалисты могут правильно оценить более 95% яйцеклеток и эмбрионов. Надлежащее оборудование включает стереомикроскоп с хорошей оптической

системой и достаточным увеличением, подходящие пипетки для манипуляций с эмбрионами (или другие приспособления), а также пригодные чашки Петри и среды для эмбрионов.

Специалисты, оказывающие услуги по трансплантации эмбрионов, обычно используют систему оценки качества и классификации эмбрионов IETS. Хотя эта система субъективна, она позволяет практикующим специалистам и исследователям регистрировать данные в форме, пригодной для последующего анализа. Большинство крупных массивов данных о трансплантации эмбрионов поступает из коммерческой практики, однако свой вклад в накопление знаний внесли и научные исследования.

Например, стадия развития эмбрионов мало влияет на частоту наступления стельности после трансплантации свежих эмбрионов, полученных in vivo от донорских животных, синхронизированным реципиентам, если эмбрионы соответствуют кодам стадий IETS от 4 (компактная морула) до 7 (расширенная бластоциста). Такой результат получен как в исследованиях меньшего масштаба,²⁴ так и в более крупных исследованиях, включавших ретроспективный анализ данных, собранных коммерческими компаниями по трансплантации эмбрионов за несколько лет.²⁵ Однако в последнем исследовании была отмечена более низкая частота наступления стельности после трансплантации вылупившихся бластоцист (код стадии 8).

Аналогичным образом эмбрионы с кодами стадий IETS 4, 5 и 6, полученные in vivo от донорских животных, одинаково хорошо переносят замораживание и оттаивание (то есть частота наступления стельности после трансплантации эмбрионов одной категории качества не различается). Однако категория качества эмбрионов — важнейший фактор, влияющий на то, насколько

хорошо они переносят замораживание и оттаивание. После трансплантации эмбрионов категорий качества 1 и 2 частота наступления стельности обычно выше, чем после трансплантации эмбрионов категории 3. В одном исследовании²⁴не выявило различий в частоте наступления беременности у коров, которым пересадили эмбрионы класса 1 или 2 (74.1% и 71.8% соответственно), тогда как другое исследование¹⁶показало, что при пересадке эмбрионов класса качества 1 вероятность зачатия была выше (отношение шансов 1.62), чем при пересадке эмбрионов класса качества 2 или 3. Сообщалось, что частота зачатия при пересадке эмбрионов класса качества 1 составляла 76% для свежих эмбрионов и 64% для замороженных эмбрионов.²⁶

Заключение

Способность точно определять стадию развития и качество эмбрионов крупного рогатого скота имеет решающее значение для успеха программы пересадки эмбрионов. Чтобы не выбросить жизнеспособные эмбрионы и не пересадить или криоконсервировать неоплодотворённые яйцеклетки, яйцеклетки и эмбрионы, полученные от доноров, необходимо тщательно исследовать с помощью стереомикроскопа. Специалистам, оценивающим эмбрионы, рекомендуется проходить интенсивное и регулярное обучение, а при оценке эмбрионов — последовательно применять единую методику. Для точной оценки всей поверхности прозрачной оболочки, а также всех клеток самого эмбриона крайне важно перекатывать эмбрионы в чашке Петри. При каждом получении эмбрионов от коровы после суперовуляции следует ожидать