Для определения площади слизистых оболочек проводят убой животных, желудок извлекают, каждую камеру вскрывают, освобождают от содержимого, после чего стенки той или иной камеры разрезают на отдельные участки, удобные для фиксации на чертёжном листе бумаги при помощи булавок. Каждый отдельный участок стенки расправляют, фиксируют, плотно примыкая его к соседним участкам. Границы суммарной площади очерчивают на чертёжной бумаге и затем измеряют планиметром ПП-М, предназначенным для определения площади плоских поверхностей в см² с точностью измерения + 0,2%. При измерении необходимо учитывать все складчатые образования слизистой оболочки. Двухсторонние листочки книжки и складки сычуга очерчивают дважды. Учитывают также перегородки ячеек сетки. После трёхкратного измерения площади каждой камеры желудка выводят её средний показатель.
2.11. Методика изучения переваривания клетчатки симбионтной микрофлорой
В перфорированную полиэтиленовую трубку (диаметр 0,5-0,8 см, длина 5-6 см) вставляют источники целлюлозы (высушенные до постоянного веса бумажный фильтр или гигроскопическую вату). Капсулу (трубку) вставляют в сшитый капроновый (лавсановый) мешочек и помещают мешочек на капроновой нитке (шнурке) в полость рубца на 24 ч.
После 24-часовой инкубации капсулу за шнурок извлекают, бумажный фильтр или вату промывают в дистиллированной воде, высушивают до постоянного веса и устанавливают в граммах и процентах уменьшение массы источника целлюлозы за период инкубации.
2.12. Методика изучения переваривания растительного белка симбионтной микрофлорой
Методика разработана А.Я.Рябиковым и А.Н.Симикиным (авторское свидетельство № 1687257).
Изучение переваривания растительного белка в рубце проводится аналогично изучению переваривания целлюлозы. Только
вместо клетчатки используют высушенную клейковину, полученную из пшеничной муки (в виде лепёшки размером с 1-рублёвую монету), помещают в капроновый (лавсановый) мешочек.
2.13. Методика подсчёта инфузорий
В смеситель для подсчёта лейкоцитов насасывают процеженную через ситечко или отжатую через два слоя марли жидкость рубца, сетки, книжки и сычуга до метки 1,0. Затем разбавляют 4% раствором формалина до метки 11,0, смешивают содержимое в ампулообразном расширении в течение трёх минут. Удалив первую каплю из смесителя вносят исследуемую жидкость в счётную камеру Горяева. Число инфузорий подсчитывают в 100 больших неразграфлённых квадратах. Микроскоп МБИ-3, окуляр – 7, объектив – 40. Расчёт проводят по формуле для подсчёта лейкоцитов. Но затем пересчитывают на 1 см:
Х = (K · 4000 · 10 / 1600) · 1000,<br><!-- End of picture text -->
где:
Х – число инфузорий в 1 см³;
К – число инфузорий, подсчитанных в 100 больших квадра-
тах;
4000 – число объёмов, необходимое для получения 1 мм³; 10 – степень разведения; 1600 - число маленьких квадратов; 1000 – число мм³ в 1 см³.
Проведя необходимые сокращения, можно определить число инфузорий в 1 см³ рубцовой жидкости по формуле:
Х = К · 25000.
Одновременно с подсчётом количества инфузорий можно при помощи клавиш машинки для выведения лейкоцитарной формулы, определить видовой состав инфузорий, предварительно изучив морфологические признаки отдельных видов инфузорий.
2.14. Методика определения рН содержимого желудка
Определение рН процеженной рубцовой жидкости проводили электрометрически при помощи лабораторного рН-метра ЛПУ-01.
2.15. Методика определения концентрации летучих жирных кислот (ЛЖК) в содержимом камер желудка
Концентрацию ЛЖК определяли методом паровой дистилляции в аппарате Маркгама.
2.16. Методика определения процентного соотношения ЛЖК
Определение соотношения отдельных ЛЖК – уксусной, пропионовой, масляной – приводили на газожидкостном хроматографе «Хром-31».
2.17. Методика изучения бродильных процессов в камерах желудка жвачных животных
Принцип метода определения интенсивности брожения заключается в определении объёма образующихся при брожении газов. Выделяющаяся из бродильной массы (сосуд №1) смесь газов (углекислый газ, метан, водород и др.) по замкнутой системе поступает в соседний сосуд (№2) и вытесняет из него воду, которая поступает в измерительный сосуд (№3). По количеству выделенной воды в мл судят о силе брожения (рис. 23).
Для исследования в бродильный сосуд (№1) вносится 5 мл 5% раствора глюкозы и 25 мл содержимого рубца от контрольных и аналогично от опытных животных. Бродильные сосуды, соединённые с сосудами, содержащими воду и с приёмниками (от контрольных и опытных животных), помещают в термостат и выдерживают 24 ч при температуре 39°С.
