поставил опыты на растущих поросятах и крысах in vivo и использовал метод in vitro [752]. Использовали для свиней илеальный метод, а для крыс – метод убоя.
Balle (2002) доказал, что крысы могут быть чѐткой тестмоделью для растущих свиней [282]. Переваримость in vitro была определена с использованием пепсина и панкреатина. В основном хорошее соответствие (воспроизведение результатов, сходимость) отмечено для всех трѐх методов. Метод in vitro удобен малым количеством образцов, его можно использовать при оценке переваримости сырого протеина и аминокислот кормов без данных опытов in vivo .
Биохимический метод Карпентера in vitro [37, 157, 158] оценки доступности лизина (основной незаменимой аминокислоты для свиней) основан на реакции эпсилонаминогруппы лизина интактного белка с I-фтор-2,4динитробензолом с образованием прочно окрашенного соединения эпсилон-2,4-динитрофениллизина, содержащего доступны лизин. При кислотном гидролизе белка, предварительно обработанного I-фтор-2,4-динитробензолом, ДНФ-лизин высвобождается из белковой молекулы. Его отделяют от других сопутствующих веществ и проводят количественное определение. Метод не достаточно пригоден для кормов, богатых карбогидратами, поскольку в процессе кислотного гидролиза значительная часть ДНФ-лизина под воздействием углеводов разрушается. Возникают и другие помехи, связанные с образованием сопутствующих ДНФ-лизину окрашенных продуктов. Впоследствии авторы применили хроматографическую колонку с ионообменной смолой для разделения лизина и колориметрического определения его в элюате. Этот метод был модернизирован рядом исследователей. Известна модификация Роуча и Сандерсена как «silcock» - метод, в переводе - метод «остаточного лизина» [Цит. по 47] доступный лизин определяется по разности между общим содержанием его в кислотном гидролизате зерна и остаточным лизином в гидролизате того же образца, но предварительно обработанного I-фтор-2,4-динитробензолом. Остаточный – это недоступный для кишечного усвоения лизин, но освобождаемый
от блокирующих его веществ в результате кислотного гидролиза. К этой модификации метода есть и дополнения
Так, доступный лизин в виде соединений ТНФ и ДНФ определяется путѐм спектрофотометрии, а метод назван «объединѐнным ДНФБ-лизиндекарбоксилазным» [47, 101, 103, 105, 192]. По мнению авторов химические методы удобны для широкого использования в условиях производственной аналитической лаборатории.
Известен опыт исследователей в использовании тесткультур микроорганизмов при изучении доступности аминокислот. Надѐжность этого метода зависит от адекватности потребностей в аминокислотах микроорганизмов потребностям в таковых изучаемого животного [37]. Принцип метода заключается в сравнении роста бактериальной культуры на контрольных средах-стандартах со смесью аминокислот с известным содержанием доступной аминокислоты и опытных средах с испытуемой аминокислотой. Используются микроорганизмы Streptococcus zimogenes или Tetrahymena pyriformis [37, 620-621]. Первые применяются для определения доступного метионина после предварительной обработки исследуемого материала папаином. С помощью вторых можно определить доступность лизина. Методы достаточно трудоѐмкие из-за чувствительности микроорганизмов к различным воздействиям со стороны небелковых компонентов корма и поэтому используются в исследованиях ограниченно [37].
Таким образом, в условиях необходимости рационального использования кормовых ресурсов очевидна значимость знания доступности аминокислот кормов и кормовых смесей для оптимизирования рационов и поиска самого точного и технически выполнимого метода еѐ оценки в условиях научного эксперимента.
В отечественной и зарубежной научной практике апробировано множество методов оценки доступности, каждый из которых имеет свои преимущества и недостатки. Чаще других используют метод Куикена или (Т) традиционный метод [37, 515]. Он особенно ненадѐжен при изучении растительных кормов с низкой биологической ценностью белка. Причина
неточности метода - переоценка получаемых показателей доступности всасывания аминокислот. Этот момент объясняется тем, что биохимические превращения аминокислот и метаболические процессы, связанные с микрофлорой толстой кишки, не сказываются на усвоении азота организмом свиней, а продуктивное всасывание аминокислот завершается в подвздошной кишке - каудальной части илеума.
При определении доступности аминокислот кормов, особенно зерновых, бобовых или белковых концентратов, подвергнутых чрезмерной или недостаточной тепловой обработке, более эффективен илеальный метод (И). В отечественной научно-хозяйственной практике метод (И) не нашѐл широкого применения. Пока ещѐ нет статистически наработанных данных о доступности аминокислот традиционного набора кормов, используемых в кормлении свиней. Поэтому работа с методом (И) и нормирование рационов для свиней по доступным аминокислотам представляет особый научный и практический интерес для оптимизации кормления, использования нетипичных кормовых средств и экономии кормов.
Наиболее широко используется метод определения переваримости азотсодержащих веществ корма, впервые предложенный в начале прошлого столетия K.Thomas (1909) и разработанный в 1923-1924 гг. H.H. Mitchell и зарегистрированный в качестве стандартного для определения биологической ценности продуктов питания всемирными организациями ФАО и ВОЗ в 1966 году [565, 566, 716]. Метод основан на количественной оценке азота корма, оставшегося от переваривания в желудочно-кишечном тракте животных. K.Thomas (1909), изучая вопрос об обмене азота в организме и биологической ценности белка как процентном отношении отложенного азота к переваренному в кишечнике, предложил формулу (2) переваримости азотсодержащих веществ [716]:
Nк- Nкл
Nп = * 100 , где (2)
Nк
