витаминных препаратов, микрои макроэлементов в соответствии с потребностью, а также из крахмала, растительного масла и клетчатки. Смесь содержит все аминокислоты за исключением изучаемой, например, лизина. Кристаллический лизин с условной доступностью 100 % добавляют к ОР в различных количествах, например, ОР+0,05; ОР+ 0,1; ОР+0,6; ОР+0,7 лизина.
По росту животных на этих рационах строят эталонный расчѐтный график роста, накладывая на ось абсцисс содержание доступного лизина в рационе, а на ось ординат – показатели роста в виде прироста живой массы в граммах. Испытуемый источник белка, например, пшеница, вводится в основной рацион взамен крахмала, например, ОР (25), ОР (50); ОР 75) % пшеницы. При этом предполагается, что рост животных будет изменяться только от уровня доступной аминокислоты при прочих аналогичных условиях.
По расчѐтному графику находят, какому количеству аминокислоты соответствует тот или иной показатель роста. Доступность аминокислоты рассчитывается по формуле (1):
А
Ад = * 100, где (1)
Ак
А - количество аминокислоты, найденное по расчѐтному графику роста ;
Ак - количество аминокислоты, найденное по результатам аминокислотного анализа корма.
Разновидностью описанного метода может служить ростовой метод «замещения» для определения доступности лизина. Он основан на оценке способности исследуемого белка компенсировать недостаток лизина в стандартном рационе с 25 % пшеничного глютена, содержащем все незаменимые аминокислоты, кроме лизина [28].
Метод оценки доступности аминокислот, основанный на количественном определении пула свободных аминокислот венозной крови, взятой непосредственно из воротной вены печени через катетер, заимствован из медицинской практики и
модифицирован для животных [214, 359-365, 368, 370, 424, 704, 720].
Насыщение плазмы крови печѐночной воротной вены свободными аминокислотами строго зависит от поступления аминокислот корма из кишечника свиней. Этого нельзя сказать об артериальной крови, где эта зависимость не прослеживается [191]. Аминокислоты корма, освобождаются при переваривании в кишечнике в соотношениях, сходных с теми, которые имеются в сыром протеине корма, и всасываются относительно быстро и приблизительно в тех же соотношениях [362]. Для количественного определения всосавшихся аминокислот необходимо учитывать скорость кровотока, площадь сечения сосудов, взятых для исследования, пул аминокислот эндогенного происхождения. Скорость кровотока установить сложно технически. Однако R. Braude утверждает, что скорость потока портальной крови значительно повышается после кормления, соответственно происходит более интенсивный отток аминокислот без особых изменений со стороны концентрации ПСА [308-310].
Биохимические методы оценки доступности in vitro используются некоторыми авторами. Так, Babinszky, e.a. (1990), Cone (1993) использовали пепсин-панкреатиновый метод. Boisen и Fernandes (1995), Boisen, (1998) усовершенствовали этот метод, основанный на пепсинпанкреатиновом переваривании изучаемого белка вне живого организма в различных средах с препаратами протеолитических энзимов пищеварительных желѐз животных: пепсином, панкреатином, трипсином, химотрипсином, эрепсином, проназой, натуральными желудочным и кишечным соками [303305]. Количественно определяются доступные аминокислоты, освобождѐнные в процессе ферментолиза in vitro , попадающие в диализат. Метод высоко воспроизводим (Yin,2000, Balle,2002). И достаточно высока корреляция коэффициентов доступности аминокислот, полученных этим косвенным методом, с данными прямых in vivo [282, 753].
Yin с соавторами (2002) при изучении переваримости ячменя, пшеницы, соевой и рапсовой муки параллельно
поставил опыты на растущих поросятах и крысах in vivo и использовал метод in vitro [752]. Использовали для свиней илеальный метод, а для крыс – метод убоя.
Balle (2002) доказал, что крысы могут быть чѐткой тестмоделью для растущих свиней [282]. Переваримость in vitro была определена с использованием пепсина и панкреатина. В основном хорошее соответствие (воспроизведение результатов, сходимость) отмечено для всех трѐх методов. Метод in vitro удобен малым количеством образцов, его можно использовать при оценке переваримости сырого протеина и аминокислот кормов без данных опытов in vivo .
Биохимический метод Карпентера in vitro [37, 157, 158] оценки доступности лизина (основной незаменимой аминокислоты для свиней) основан на реакции эпсилонаминогруппы лизина интактного белка с I-фтор-2,4динитробензолом с образованием прочно окрашенного соединения эпсилон-2,4-динитрофениллизина, содержащего доступны лизин. При кислотном гидролизе белка, предварительно обработанного I-фтор-2,4-динитробензолом, ДНФ-лизин высвобождается из белковой молекулы. Его отделяют от других сопутствующих веществ и проводят количественное определение. Метод не достаточно пригоден для кормов, богатых карбогидратами, поскольку в процессе кислотного гидролиза значительная часть ДНФ-лизина под воздействием углеводов разрушается. Возникают и другие помехи, связанные с образованием сопутствующих ДНФ-лизину окрашенных продуктов. Впоследствии авторы применили хроматографическую колонку с ионообменной смолой для разделения лизина и колориметрического определения его в элюате. Этот метод был модернизирован рядом исследователей. Известна модификация Роуча и Сандерсена как «silcock» - метод, в переводе - метод «остаточного лизина» [Цит. по 47] доступный лизин определяется по разности между общим содержанием его в кислотном гидролизате зерна и остаточным лизином в гидролизате того же образца, но предварительно обработанного I-фтор-2,4-динитробензолом. Остаточный – это недоступный для кишечного усвоения лизин, но освобождаемый
